[发明专利]一种健骨注射液HPLC指纹图谱的构建方法

权利要求书

1.一种健骨注射液HPLC指纹图谱的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)供试品溶液的制备：取本品，加20％乙腈，制成按体积比计浓度为10％的供试品溶液；

(2)对照品溶液的制备：分别取夏佛塔苷、维采宁-2和维采宁-3对照品适量，加20％乙腈制成每1ml含100～200μg夏佛塔苷、150～250μg维采宁-2、50～100μg维采宁-3的混合对照品溶液；

(3)高效液相色谱法分析，记录指纹图谱，即得：色谱条件为进样量10μl；色谱柱为WelchUltimate XB-C18；以乙腈为流动相A，0.3％冰乙酸溶液为流动相B；梯度洗脱，洗脱时间0～70min，对应流动相A变化为：10～20％A，流动相B为90～80％；柱温30℃；检测波长340nm。

2.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述的步骤(2)对照品夏佛塔苷、维采宁-2和维采宁-3的浓度分别是150μg/ml，230μg/ml，70μg/ml。

3.一种健骨注射液HPLC标准指纹图谱的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)共有模式图谱的生成：按权利要求1所述的方法，得十批次以上的健骨注射液样品HPLC指纹图谱，将图谱导入指纹图谱分析软件，生成共有模式指纹图谱；

(2)共有峰的确认：对共有模式指纹图谱主要峰进行确认，确定共有特征峰7个，依次为1号峰为维采宁-2、3号峰为夏佛塔苷、4号峰为维采宁-3，2号峰、5号峰、6号峰、7号为芹菜素糖苷类化合物；确认共有峰的共有模式指纹图谱为所述的标准指纹图谱。

4.如权利要求3所述的构建方法，其特征在于，所述共有峰的确认方法具体为：UFLC-TRIPLE TOF-DAD-MS/MS技术手段对主要峰进行色谱峰归属及峰纯度检测及确认；质谱工作参数为：喷雾电压-1500V，ion source gas 1 150psi,ion source gas2 260psi，离子源温度550℃，气帘气15psi，碰撞气体压力8psi,入口电位10V；用ESI电喷雾离子源，负离子模式进行检测。

5.如权利要求3或4所述的构建方法，其特征在于，所述共有模式指纹图谱以3号峰夏佛塔苷为参照物峰，各共有峰的相对保留值如下表所示:

6.一种健骨注射液的质量检测方法，包括以下步骤：

(1)按权利要求1或2所述方法建立健骨注射液待测样品指纹图谱；

(2)对比检测，将步骤(1)所述待测样品指纹图谱与权利要求3所述标准指纹图谱对比，待检样品指纹图谱中，呈现7个对应特征峰；按中药色谱指纹图谱相似度评价系统计算，待检样品指纹图谱与标准指纹图谱的相似度不低于0.90。