[发明专利]具改善骨质疏松作用的多肽及其制备方法和应用

说明书

本发明涉及一种具改善骨质疏松作用的多肽及其制备方法和应用，属于天然活性产物技术领域。该多肽的制备方法包括以下步骤：脱脂：将鹿骨以CO²超临界萃取的方式进行脱脂；研磨：将上述脱脂后的鹿骨通入液氮进行研磨，得骨粉；提取蛋白：将上述骨粉置于Tris‑HCl缓冲溶液中，在15‑30℃下以匀浆器研磨提取热不稳定性蛋白，待用；再将骨粉置于Tris‑HCl缓冲溶液中，在100‑150℃、0.1‑0.2MPa的条件下提取热稳定性蛋白，待用；蛋白纯化：将上述热不稳定性蛋白和热稳定性蛋白混合，以葡聚糖凝胶柱纯化，得到平均分子量为15‑19KD的鹿骨蛋白；发酵：将上述鹿骨蛋白以乳酸菌进行发酵，得到平均分子量为5KD‑10KD的鹿骨多肽，即得。该多肽可通过调节骨代谢而增加骨质疏松大鼠的骨密度。

技术领域

本发明涉及天然活性产物技术领域，特别是涉及一种具改善骨质疏松作用的多肽及其制备方法和应用。

背景技术

骨质疏松是一种以低骨量和骨组织微结构破坏为特征，钙质由骨骼往血液净移动的矿物质流失，骨质量减少，骨骼内孔隙增大，出现中空疏松现象，导致骨质脆性增加和易于骨折的全身性骨代谢疾病，速度取决于破骨细胞和成骨细胞活性的消长。骨质疏松性骨折的发病率逐年增长，但目前对其发病机制及愈合方式尚不清晰，防治效果不理想，且再次骨折率高。临床上，将骨质疏松症分为两大类，分别为原发性骨质疏松症和继发性骨质疏松症，其中原发性骨质疏松症包括绝经后骨质疏松症和老年性肤质疏松症；继发性骨质疏松症是由疾病或药物等引起。

现阶段对骨质疏松的药物治疗主要是钙剂、维生素D和骨吸收抑制剂(包括雌激素、选择性雌激素受体调节剂、双膦酸盐等)等三大类药。但研究表明，长期使用激素替代疗法会增加患乳腺癌、冠心病等疾病的几率，其他临床上使用的化学合成药物均存在一定的副作用。而鹿骨具有天然，多效，无毒等特点，鹿骨中寻找能够预防和/或治疗骨质疏松症的有效成分是迫切需要解决的课题。

发明内容

基于此，有必要针对上述问题，提供一种具改善骨质疏松作用的多肽，该多肽可通过调节骨代谢而增加骨质疏松大鼠的骨密度。

一种具改善骨质疏松作用的多肽的制备方法，包括以下步骤：

脱脂：将鹿骨以CO²超临界萃取的方式进行脱脂；

研磨：将上述脱脂后的鹿骨通入液氮进行研磨，得骨粉；

提取蛋白：将上述骨粉置于Tris-HCl缓冲溶液中，在15-30℃下以匀浆器研磨提取热不稳定性蛋白，待用；再将骨粉置于Tris-HCl缓冲溶液中，在100-150℃、0.1-0.2MPa的条件下提取热稳定性蛋白，待用；

蛋白纯化：将上述热不稳定性蛋白和热稳定性蛋白混合，以葡聚糖凝胶柱纯化，得到平均分子量为15-19KD的鹿骨蛋白；

发酵：将上述鹿骨蛋白以乳酸菌进行发酵，得到平均分子量为5KD-10KD的鹿骨多肽，即得。

上述制备方法，首先，选取鹿骨提取多肽，其中，鹿骨为鹿科动物梅花鹿或马鹿的骨。药用首载于《名医别录》，《本草纲目》记载：“鹿骨味甘，微热，无毒。主补内虚，续绝伤，补骨强筋，除风，久服耐老”。鹿骨中含有大量蛋白质、骨胶原、磷脂质、软骨素和磷蛋白，有益于骨形成，促进体内胶原蛋白及弹性蛋白的更新，延缓骨吸收，促进软骨内骨化等过程。

并且，上述多肽的制备方法，先对鹿骨进行脱脂，可获得更干燥的原料粉末，并可增加其亲水性，使鹿骨中蛋白提取更充分。再对从鹿骨中提取得到的两种蛋白提取液进行发酵处理，并在发酵之后以超滤柱进行超滤，得到分子量大小集中在5KD-10KD的范围内的多肽。以该多肽作用于骨质疏松模型大鼠，对其骨密度增强具有非常好的促进作用。

在其中一个实施例中，在所述脱脂步骤之前，还包括预处理步骤，所述预处理步骤为：取鹿骨，剔除非骨成分，清洗干净，粉碎至体积为1-2cm³的碎块。