[发明专利]一种提取和检测根际土壤细菌群感信号分子的方法

权利要求书

1.一种提取和检测根际土壤细菌群感信号分子的方法，包括以下步骤：

样品采集：随机选择固定样地中一个标准地的杨树，在每颗杨树的距树干基部0.5 m的距离埋设内生长管，将埋设的内生长管带回实验室；

收集根际土：将杨树细根放入离心管中，用涡旋震荡器进行震荡，将细根表面的土壤作为根际土；

土壤提取液中AHLs 的测定：在离心管中加入根际土，加内标物，然后加入水，涡旋震荡浸提，接着加入乙酸乙酯，再涡旋萃取后离心，吸取上层乙酸乙酯相，旋转蒸发至干，然后加入甲醇和水混合液，震荡均匀，通过尼龙过滤膜后于进样瓶中，HPLC-MS测定。

2.根据权利要求1所述的一种提取和检测根际土壤细菌群感信号分子的方法，其特征在于：步骤1）将埋设的内生长管按照取样点编号在低温条件带回实验室。

3.根据权利要求1所述的一种提取和检测根际土壤细菌群感信号分子的方法，其特征在于：步骤2）收集根际土后在土壤中加入变色硅胶以进行土壤干燥。

4.根据权利要求1所述的一种提取和检测根际土壤细菌群感信号分子的方法，其特征在于：步骤3）中，加水后涡旋震荡10分钟，浸提30分钟。

5.根据权利要求1所述的一种提取和检测根际土壤细菌群感信号分子的方法，其特征在于：步骤3）中，加入乙酸乙酯后涡旋萃取10分钟，以4500r·min-1 离心5min。

6.根据权利要求1所述的一种提取和检测根际土壤细菌群感信号分子的方法，其特征在于：步骤3）中，加入甲醇和水混合液的比例为2:8。

7.根据权利要求1所述的一种提取和检测根际土壤细菌群感信号分子的方法，其特征在于：步骤3）中，吸取上层乙酸乙酯量相的量为加入乙酸乙酯量的一半。

8.根据权利要求1所述的一种提取和检测根际土壤细菌群感信号分子的方法，其特征在于：步骤3）中，色谱条件为Hypersil GOLD C18色谱柱( 2.1mm×100mm，3μm)；流速：0.3ml/min；进样量：5ul；分析时间：6.5 min ；柱温：40℃；流动相A为0.1%甲酸水溶液，流动相B为0.1%甲酸乙腈溶液。

9.根据权利要求8所述的一种提取和检测根际土壤细菌群感信号分子的方法，其特征在于：步骤3）中，色谱的梯度洗脱条件：0-0.5min，20%B；0.5-1.5min，20%-90%B；1.5-5.0min，90%B；5.0-5.5min，90%-20%B，5.5-6.5min，20%B。

10.根据权利要求1所述的一种提取和检测根际土壤细菌群感信号分子的方法，其特征在于：步骤3）中，质谱条件为电喷雾离子源ESI；正离子MRM扫描；碰撞活化参数（CAD）：8；气帘气（CUR）：35psi；雾化气（GS1）：55psi；辅助气（GS2）：55psi；离子源电压（IS）：5500V；离子源温度（TEM）：550℃。