[发明专利]均环肽Cyclo-(Cys)6

说明书

本发明公开了一种均环肽Cyclo‑(Cys)₆的制备方法，包括：(1)树脂与带保护基的半胱氨酸进行反应连接，形成连接有一个半胱氨酸的树脂；(2)树脂连接的一个半胱氨酸与带保护基的半胱氨基酸连续缩合，形成连接有直链肽的树脂；(3)直链肽从树脂上切割下来，首尾相连环化，得到环肽粗品；(4)环肽的纯化与保存。本发明所制备的Cyclo‑(Cys)₆为由单一氨基酸所形成的均环肽结构，具有与冠醚类化合物极其类似的结构，分子在结构上具有很好的规整性及多向对称性，更易于自组装成为离子通道或者纳米管，从而作为药物载体、膜通道、分子器件等；侧链上含有多个巯基官能团，使得其具有更好的反应活性，可作为高效点击反应的前体试剂；同时，工艺合理、操作简捷，且合成效率较高。

技术领域

本发明属于多肽合成技术领域，涉及环肽类化合物的固相化学制备方法，尤其涉及环肽化合物环肽Cyclo-(Cys)₆及其合成制备工艺。

背景技术

环肽在结构组成上与普通链状肽类具有结构的高度相似性，但因其主体结构中氨基酸残基参与连接成环，以致分子中的游离羧基、氨基等亲水基团消失或减少，使得其极性降低、脂溶性增强、对体内氨/羧肽酶的敏感性降低、在生物体内的稳定性增加；同时，肽链运动的自由度减少，在溶液中具有相对稳定的明确构象，与受体契合的可能性明显提高。

现有技术中，合成环肽首先是合成链状肽前体。链状肽的合成方法目前主要有固相法和液相法两种合成方式，由于固相法独特的优势，已成为实验室多肽合成的首选方法，直链肽的合成已趋自动化和商业化，但环肽的合成还存在着一定的难度，其关键问题在于链状肽的合环步骤。通常环状肽的合环方式分为首尾相连、侧链之间相连、侧链与端基相连，或借助于二硫键、酯键(宓鹏程,潘俊峰,马亚平,袁建成.一种环酯肽Orafamide A的固相合成方法.CN 103626848 B[P].2013-11-29)等相连；其中，链状肽首尾相连成环的合成难度更大，但也更具有研究意义。通常情况下，合成首尾相连型环肽的经典方法是在稀溶液(10^-3～10^-4mol.L^-1)中，用活泼酯法或叠氮法将带有保护基的的线性前体肽选择性地活化并合环；使用二环己基碳二亚胺(DCC)、 4-二甲氨基吡啶(DMAP)等有机缩合剂，产率通常低于30％，且反应时间很长。

近年来，2-(7-偶氮苯并三氮唑)-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU)、苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(HBTU)、1-羟基苯并三氮唑(HOBt)、 O-苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲四氟硼酸(TBTU)等苯并唑类有机缩合剂的使用，为环肽合成方法的研究提供了很大帮助；但迄今为止，主要应用于 RGD环肽(含有精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸的环肽)的合成(王锡平.RGD合成制备工艺.CN,103588863B[P].2013-11-15.)，尚未见有关新型均环肽 Cyclo-(Cys)₆，尤其是其化学制备方法相关工艺的报道。

发明内容

本发明的一个目的是解决至少上述问题和/或缺陷，并提供至少后面将说明的优点。

为了实现根据本发明的这些目的和其它优点，提供了一种均环肽 Cyclo-(Cys)₆的制备方法，包括：

步骤一、将树脂溶胀后除去溶剂，取氨基带芴甲氧羰酰基保护基和侧链巯基带三苯甲基保护基的半胱氨酸、N,N-二异丙基乙胺加入树脂中，再加入 DMF使之溶解，室温下震荡反应30～60min；然后加入甲醇孵育20min；用 DMF和甲醇溶剂反复清洗树脂并抽掉溶剂，第一个氨基酸连接在树脂上；去掉溶剂后，加入裂解液，去除半胱氨酸氨基上的保护基芴甲氧羰酰基；取样检测确保氨基酸已经连接在树脂上，且已裸露出不带保护的氨基；