[发明专利]适用于检测牛奶中残留的β‑内酰胺酶的色差检测方法

说明书

技术领域

本发明公开了一种牛奶检测领域，尤其是适用于检测牛奶中残留的β-内酰胺酶的色差检测方法。

背景技术

随着经济的飞速发展，人们的生活水平随之提高，对生活品质的追求也越来越高。牛奶，已成为日常生活饮品进入人们的生活中。但是牛奶中会含有残留的β-内酰胺酶，由于国内外的针对性研究比较少，甚至连温度对β-内酰胺酶活性的影响程度、β-内酰胺酶及其代谢产物的食用安全性不明确，所以在食品行业中β-内酰胺酶是不允许使用添加的。

为了实现对市售牛奶中β-内酰胺酶抗生素的检测，本发明采用根据试剂盒检测法的基础上加入色差计法进行检测，能够快速、经济、精确的检测出牛奶中的残留抗生素，满足目前我国市场需求。

发明内容

为了实现对市售牛奶β-内酰胺酶残留的检测，同时也为解决目前我国缺少经济，精确，快速的β-内酰胺酶残留检测的问题，达到让消费者放心的目的，本发明提出了一种在试剂盒检测法的基础上加入色差计法使其最终最低检出限大大降低的检测方法，其技术方案如下：

适用于检测牛奶中残留的β-内酰胺酶的色差检测方法，其特征在于：利用色差计检测样品中β-内酰胺酶与头孢硝噻吩显色后底物的色度，并通过标准曲线法测定出样品中β-内酰胺酶的含量，具体操作步骤如下：

(1)吸取10mL牛奶待测样品置入无色透明试管中；

(2)将上述步骤(1)的试管中加入浓度为500mg/ml的头孢硝噻吩溶液和1-5U/μl的β-内酰胺酶储备液震荡均匀；

(3)将上述步骤(2)中的试管管口以保鲜膜封口，并置于水浴锅中反应，水浴完成后进行降低酶活；

(4)将上述步骤(3)灭酶后的试管迅速取出震荡均匀，并进行色差计测定，记录测定数据，包括但不局限于：明度(L)、a通道(洋红色至绿色的范围)、b通道(黄色至蓝色的范围)、色差(ΔE)；

(5)根据上述步骤(4)中测定的色差值数据，计算出样品中β-内酰胺酶的含量。

进一步的，所述步骤(1)中设置共六组试管，其中一组为空白对照组。

进一步的，所述β-内酰胺酶的最低检出限在1U/mL。

进一步的，所述步骤(1)中牛奶待测样品，采用无抗奶粉和50℃-100℃温水，以1:6—1:10的比例进行配置待用。

进一步的，所述步骤(3)中水浴反应温度为30℃，水浴时间为3min。

进一步的，所述步骤(3)中采用冰水浴降低酶活，降低酶活反应时间为5s-20s。

进一步的，所述步骤(2)中β-内酰胺酶储备液用量分别为0μl、2μl、4μl、6μl、8μl、10μl。

进一步的，所述头孢硝噻吩溶液用量为30μl—50μl。

本发明与现有技术相比，有如下优点：

本发明利用色差计测定色差值测定牛奶中残留的β-内酰胺酶的含量，与现有的头孢硝噻吩试纸检测法，大大降低了β-内酰胺酶的最低检出限，适用于目前我国市售牛奶检测的现状；同时本发明利用正交试验，确定反应温度、头孢硝噻吩溶液量、反应时间对于整体反应的影响，进而绘制标准曲线，进而确定最适反应条件，接着以最适反应条件为前提，利用色差计测定色差值进行不同β-内酰胺酶浓度对头孢硝噻吩显色程度的影响；本发明具有颜色的变化清晰，灵敏度高，操作简单，耗时短的特点，能够快速、高效的检测出牛奶中残留的β-内酰胺酶，经济成本低，社会效益高。

附图说明

图1为反应时间与试验指标的关系图。

图2为反应温度与试验指标的关系图。

图3为头孢添加量与试验指标的关系图。

图4为酶浓度与对比色差值标准曲线示意图。

具体实施方式

下面结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一本分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明的保护范围。

为了达到本发明的目的，本发明提出适用于检测牛奶中残留的β-内酰胺酶的色差检测方法，利用色差计检测样品中β-内酰胺酶与头孢硝噻吩显色后底物的色度，并通过标准曲线法测定出样品中β-内酰胺酶的含量，具体操作步骤如下：

(1)配制牛奶待测样品，采用无抗奶粉和50℃-100℃温水，以1:6—1:10的比例进行配置；吸取10mL牛奶待测样品置入无色透明试管中，其中设置6组试管，并设置一组为空白对照组；