[发明专利]一种用于牦牛亲子鉴定和个体识别的基因分型检测试剂盒

权利要求书

1.一种用于牦牛亲子鉴定和个体识别的STR标记检测试剂盒，其特征在于，所述STR标记检测试剂盒中包括检测如下14个STR基因座的引物，所述14个STR基因座为BM720、BM2113、CH28AC、CSSM036、CSSME070、HAUT24、HEL6、ILSTS006、ILSTS008、INRA037、SPS115、TGLA227、YAK07和YAK08，所述14个STR基因座分为五组，其组合方式与相应的PCR扩增引物如下：

第一组的3个基因座为CSSM036、HEL6、CSSME070，相应的PCR扩增引物核苷酸序列依次如序列表中SEQ ID No.1至SEQ ID No.6所示；CSSM036、HEL6和CSSME070的引物分别采用FAM、HEX和TAMRA荧光素进行标记；

第二组的3个基因座为BM720、YAK07、SPS115，相应的PCR扩增引物核苷酸序列依次如序列表中SEQ ID No.7至SEQ ID No.12所示；BM720、YAK07和SPS115的引物分别采用FAM、HEX和TAMRA荧光素进行标记；

第三组的3个基因座为CH28AC、INRA037、HAUT24，相应的PCR扩增引物核苷酸序列依次如序列表中SEQ ID No.13至SEQ ID No.18所示；CH28AC、INRA037和HAUT24的引物分别采用FAM、HEX和TAMRA荧光素进行标记；

第四组的3个基因座为ILSTS006、YAK08、TGLA227，相应的PCR扩增引物核苷酸序列依次如序列表中SEQ ID No.19至SEQ ID No.24所示；ILSTS006、YAK08和TGLA227的引物分别采用FAM、HEX和TAMRA荧光素进行标记；

第五组的2个基因座为BM2113、ILSTS008，相应的PCR扩增引物核苷酸序列依次如序列表中SEQ ID No.25至SEQ ID No.28所示；BM2113和ILSTS008的引物分别采用FAM和HEX荧光素进行标记。

2.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，

第一组STR基因座CSSM036、HEL6、CSSME070的PCR扩增引物组成第一组引物混合液，其中扩增引物的浓度依次为5.6μmol/L、7.9μmol/L和9.2μmol/L；

第二组STR基因座BM720、YAK07、SPS115的PCR扩增引物组成第二组引物混合液，其中扩增引物的浓度依次为6.3μmol/L、6.8μmol/L和9.1μmol/L；

第三组STR基因座CH28AC、INRA037、HAUT24的PCR扩增引物组成第三组引物混合液，其中扩增引物的浓度依次为5.7μmol/L、7.3μmol/L和9.4μmol/L；

第四组STR基因座ILSTS006、YAK08、TGLA227的PCR扩增引物组成第四组引物混合液，其中扩增引物的浓度依次为6.2μmol/L、7.5μmol/L和9.7μmol/L；

第五组STR基因座BM2113、ILSTS008的PCR扩增引物组成第五组引物混合液，其中扩增引物的浓度依次为5.9μmol/L和7.6μmol/L。

3.一种用于分析DNA样品的14个STR基因座基因分型的非诊断方法，其特征在于，使用权利要求1或2所述的检测试剂盒检测牦牛DNA样本，所述牦牛DNA样本选自牦牛血液、组织样品或精液样品中的一种或多种。

4.一种如权利要求1或2所述检测试剂盒的使用方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）提取牦牛基因组DNA，基因组DNA浓度为20-500 ng/μL；

2）多重荧光PCR扩增：总反应体系为20μL，反应体系组成如下：

模板DNA 0.5μL，10×PCR反应缓冲液2.0μL，引物混合液0.5μL，ddH₂O 17μL；

3）PCR反应条件如下：

第一组，95℃预变性5分钟，95℃ 30秒、56.3℃ 30秒、72℃ 30秒，共35个循环，72℃保温6分钟；

第二组，95℃预变性5分钟，95℃ 30秒、55.6℃ 30秒、72℃ 30秒，共35个循环，72℃保温6分钟；

第三组，95℃预变性5分钟，95℃ 30秒、56.5℃ 30秒、72℃ 30秒，共35个循环，72℃保温6分钟；

第四组，95℃预变性5分钟，95℃ 30秒、56.0℃ 30秒、72℃ 30秒，共35个循环，72℃保温6分钟；

第五组，95℃预变性5分钟，95℃ 30秒、55.5℃ 30秒、72℃ 30秒，共35个循环，72℃保温6分钟；

4）将得到的每组PCR产物加入样品板，再将样品板装入遗传分析仪进行毛细管电泳；

5）利用GeneMapper^TM 4.0软件分析电泳数据，得到实际样品的基因分型数据；

所述方法为非诊断用途。