[发明专利]一种血清类胰蛋白酶的化学发光定量检测试剂盒及其制备方法和检测方法

说明书

技术领域

本发明属于医疗器械体外诊断试剂化学发光免疫分析领域，特别是涉及一种血清类胰蛋白酶的化学发光定量检测试剂盒及其制备方法和检测方法。

背景技术

类胰蛋白酶是主要由肥大细胞(MC)分泌的一种炎症介质，具有多重生物活性效应，可启动多种疾病反应的进程，并与其发生和发展有关。在很多肥大细胞相关疾病中，血清类胰蛋白酶都伴随肥大细胞的脱颗粒过程而升高。

类胰蛋白酶在cDNA和蛋白水平被分为三类：α、β、γ，其中β含量最高。每个类胰蛋白酶基因均含有6个外显子和5个内含子，编码30个氨基酸的前导链和245个氨基酸的活性部位。通过氨基酸序列推断，α-类胰蛋白酶和β-类胰蛋白酶有90％的同源性。其主要区别在于β-类胰蛋白酶的-3位和215位氨基酸分别为精氨酸和甘氨酸，而α-类胰蛋白酶则分别为谷氨酰胺和天冬氨酸，两者的结构区别决定了它们活性差异。

MC是机体速发性过敏反应的主要效应细胞，机体致敏时MC释放β-类胰蛋白酶于血液中，其在血液中浓度1h后达到高峰,半衰期为2h。这使得机体致敏数小时后仍能对β-类胰蛋白酶进行检测。通过ELISA法实验检测发现，正常人血液中只能检测到α-类胰蛋白酶，而β-类胰蛋白酶几乎检测不到。但对哮喘病人和过敏性鼻炎病人的支气管灌洗液、过敏性眼炎患者的泪水及风湿病患者的关节滑液及系统性过敏反应患者的血清中进行检测发现β-类胰蛋白酶含量显著升高。检测此类疾病时总类胰蛋白酶血清水平的变化，有望为疾病的临床诊断和治疗提供重要的依据。

化学发光免疫分析是将化学发光系统与免疫反应相结合，用化学发光相关的物质标记抗体或抗原，与待测的抗原或抗体反应后，经过分离游离态的化学发光标记物，加入化学发光系统的其他相关物产生化学发光，进行抗原或抗体的定量或定性检测。化学发光免疫测定是目前世界公认先进的标记免疫测定技术，化学发光免疫分析技术具有高度的准确度和特异性，成为检验方法中最为重要的技术之一。化学发光免疫分析能够检出放射免疫分析和酶联免疫分析等方法无法检出的低丰度物质，对疾病的早期诊断具有十分重要的意义。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种灵敏度高且最低检测限低的血清类胰蛋白酶的化学发光定量检测试剂盒。

本发明所要解决的另一技术问题是提供上述试剂盒的制备方法。

本发明所要解决的再一技术问题是提供采用上述试剂盒进行检测的检测方法。

为解决以上技术问题，本发明采取如下技术方案：

本发明的一个目的是一种血清类胰蛋白酶的化学发光定量检测试剂盒，包括如下试剂：

浓度为0.1～1mg/mL的链霉亲和素标记的纳米磁微粒悬浮液；

浓度为0.5～5μg/mL的生物素标记的鼠抗人类胰蛋白酶抗体溶液；

浓度为0.2～1μg/mL的碱性磷酸酶标记的鼠抗人类胰蛋白酶抗体溶液。

优选地，所述的鼠抗人类胰蛋白酶抗体与所述的生物素的投料摩尔比为1:5～1:20；进一步优选为1：18～1：20。

优选地，所述的碱性磷酸酶与所述的鼠抗人类胰蛋白酶抗体的投料摩尔比为2:1～10:1；进一步优选为9：1～10：1。

优选地，所述的生物素为Sulfo-NHS-Biotin、NHS-LC-Biotin或NHS-LC-LC-Biotin。

优选地，所述的试剂盒还包括类胰蛋白酶校准品和类胰蛋白酶质控品。

进一步优选地，所述的类胰蛋白酶校准品包括浓度为0.9～1.1μg/L、4.5～5.5μg/L、11.25～13.75μg/L、45～55μg/L、180～220μg/L的类胰蛋白酶溶液；所述的类胰蛋白酶质控品包括浓度为4～6μg/L、40～60μg/L的类胰蛋白酶溶液。

本发明中，所述的类胰蛋白酶校准品除了上述5个浓度以外，根据需要还可以包括多个其他浓度。

本发明的另一个目的是提供一种所述的血清类胰蛋白酶的化学发光定量检测试剂盒的制备方法，

所述的生物素标记的鼠抗人类胰蛋白酶抗体溶液的制备方法为：将鼠抗人类胰蛋白酶抗体加入到溶解有生物素的二甲基亚砜中，15～40℃下混合反应50～70min，再用0.009～0.011mol/L、pH为7.3～7.5的磷酸盐缓冲液进行透析制得所述的生物素标记的鼠抗人类胰蛋白酶抗体溶液；