[发明专利]一种复染染色试剂盒及制备和应用

权利要求书

1.一种复染染色试剂盒，其特征在于：由硫堇染色液和改良后EA50染色液组成，其中：

硫堇染色液：每1000ml硫堇染色液中包括： 硫堇（硫堇劳氏紫粉末）0.5-3.0g；染料助剂0.5-2g；醇20-80ml；强酸10-15ml；余量为水；

改良后EA50染色液：每1000ml所述EA50染色液中包括：亮绿0.5-0.8g、伊红3-6g、弱酸（20-30ml)、甲醇（220-300ml)、磷钨酸（1-4g），橘黄G（0.002-0.010g），余量为乙醇。

2.根据权利要求1所述的复染染色试剂盒，其特征在于：

所述染料助剂为亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠中的至少一种；

所述醇为乙醇、甲醇、乙二醇、丙二醇、丙三醇中的至少一种；

所述乙醇为95%乙醇或无水乙醇；

所述弱酸为乙酸、水杨酸和柠檬酸的一种或多种的混合物；

所述伊红为乙酸水溶性伊红或醇溶性伊红；

所述水为蒸馏水、去离子水、纯化水及体外诊断试剂用纯化水。

3.根据权利要求1-2任一所述的复染染色试剂盒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）硫堇染色液的配制:

a） 将水加热至50-70℃，加入硫堇，搅拌50-90min，冷却室温过滤；

b） 加入染料助剂和醇，搅拌均匀；

c） 使用前，加入强酸，搅拌50-90min，搅拌温度控制在20-30℃，注意避光，搅拌结束后直接用于染色；

2）改良后EA50染色液的配制：

a）亮绿：适量的亮绿充分溶解于20ml水中；

b）伊红（水溶性）：适量的伊红充分溶解于40ml水中；伊红（醇溶性）：适量的伊红充分溶解于40ml乙醇中；

c）橘黄G染色液：适量的橘黄溶于100ml水中，制备橘黄G原液；将适量橘黄G原液与乙醇混合，制备橘黄G染色液；

d）将a）和b）混合均匀；加入磷钨酸、甲醇、弱酸、乙醇和橘黄G染色液，搅拌混合均匀；

根据权利要求1-3所述的复染染色试剂盒的染色方法，其特征在于包括如下步骤：

1）病理标本预处理

样本预处理后，可进行手工染色和设备染色：

组织切片染色：二甲苯脱蜡2次，每次2-5分钟；无水乙醇2次，每次2-5分钟；水洗1-3min；固定液40-90分钟，水洗、沥干；分化液30-80分钟，水洗、沥干；硫堇染色液染色40-90分钟，水洗、沥干；95%乙醇40-90s；95%乙醇40-90s；改良后EA50染色3-5min；95%乙醇5-20s；无水乙醇5-20s；二甲苯2次，每次2分钟；脱水、透明、封片。

4.细胞涂片染色：湿固定完成后，水洗、沥干；固定液40-90分钟，水洗、沥干；分化液30-80分钟，水洗、沥干；硫堇染色液染色40-90分钟，水洗、沥干；70%乙醇40-90s；95%乙醇40-90s；改良后EA50染色3-5min；95%乙醇5-20s；无水乙醇5-20s；晾干后封片。

5.根据权利要求1-4所述的复染染色试剂盒及制备方法和应用，其特征在于，所述的复染染色试剂盒用于病理学诊断中组织学和细胞学样本染色，在不背离本发明精神和实质的情况下，对本发明方法、条件、步骤及应用所做的修改或替换，均属于本发明的范围。

6.根据权利要求1-4所述的复染染色试剂盒及应用，其特征在于，所述的复染染色试剂盒可用于显微镜分析、数字化图像分析，提高各种样本处理方法的染色效果。

7.根据权利要求1-4所述的复染染色试剂盒，其特征在于，所述的复染染色试剂盒可用于临床检测试剂、科研试剂及试剂盒。