[发明专利]基于Taqman-MGB探针的人UGT1A1基因多态性检测试剂盒在审
| 申请号： | 201710833451.7 | 申请日： | 2017-09-15 |
| 公开（公告）号： | CN109504747A | 公开（公告）日： | 2019-03-22 |
| 发明（设计）人： | 段猛;刘志明;吴诗扬;许嘉森;彭璨璨;严志会 | 申请（专利权）人： | 益善生物技术股份有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6858 | 分类号： | C12Q1/6858;C12Q1/6886;C12N15/11 |
| 代理公司： | 广州华进联合专利商标代理有限公司 44224 | 代理人： | 万志香 |
| 地址： | 510663 广东省广州市广州高新技术产业*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 探针 引物 多态性检测 试剂盒 位点 淬灭基团 错配碱基 检测结果 荧光基团 灵敏度 个位 判读 面具 检测 | ||
1.基于Taqman-MGB探针的人UGT1A1基因多态性检测试剂盒，其特征在于，包括有以下针对三个位点中的至少一个的引物和探针：针对UGT1A1*6的如SEQ ID NO.1-SEQ ID NO.2所示的引物和如SEQ ID NO.3-SEQ ID NO.4所示的探针；针对UGT1A1*28位点的如SEQ IDNO.5-SEQ ID NO.6所示的引物和如SEQ ID NO.7-SEQ ID NO.8所示的探针；针对UGT1A1-3156G>A位点的如SEQ ID NO.9-SEQ ID NO.10所示的引物和如SEQ ID NO.11-SEQ IDNO.12所示的探针；所述探针的5’端标记有荧光基团，3’端标记有淬灭基团。
2.根据权利要求1所述的基于Taqman-MGB探针的人UGT1A1基因多态性检测试剂盒，其特征在于，包括有针对UGT1A1*6、UGT1A1*28和UGT1A1-3156G>A三个位点的引物和探针。
3.根据权利要求1所述的基于Taqman-MGB探针的人UGT1A1基因多态性检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括有缓冲液、镁离子、dNTP、Taq酶。
4.根据权利要求1-3任一项所述的基于Taqman-MGB探针的人UGT1A1基因多态性检测试剂盒，其特征在于，所述探针5’端的荧光基团为FAM、VIC、或HEX中的一种，3’端的淬灭基团为NFQ。
5.基于Taqman-MGB探针的人UGT1A1基因多态性检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)提取待测模板的DNA；
(2)配制反应液，在缓冲液中加入镁离子、dNTP、权利要求1所述的引物和探针、Taq酶；
(3)将骤(1)得到的待测模板DNA分别加入到所述PCR反应液中，在荧光PCR管内混合均匀离心后，放入荧光定量PCR仪器进行PCR反应；
(4)通过荧光定量PCR仪所收集数据确定检测位点的基因型。
6.根据权利要求5所述的基于Taqman-MGB探针的人UGT1A1基因多态性检测方法，其特征在于，采用的荧光定量PCR反应条件为；95℃15分钟预变性；循环阶段，95℃15秒并在此采集荧光信号，60℃35秒，45-50个循环。
7.基于Taqman-MGB探针的人UGT1A1基因多态性检测引物和探针，其特征在于，
包括有以下针对三个位点中的至少一个的引物和探针：针对UGT1A1*6的如SEQ IDNO.1-SEQ ID NO.2所示的引物和如SEQ ID NO.3-SEQ ID NO.4所示的探针；针对UGT1A1*28位点的如SEQ ID NO.5-SEQ ID NO.6所示的引物和如SEQ ID NO.7-SEQ ID NO.8所示的探针；针对UGT1A1-3156G>A位点的如SEQ ID NO.9-SEQ ID NO.10所示的引物和如SEQ IDNO.11-SEQ ID NO.12所示的探针。
8.根据权利要求7所述的基于Taqman-MGB探针的人UGT1A1基因多态性检测引物和探针，其特征在于，包括有针对UGT1A1*6、UGT1A1*28和UGT1A1-3156G>A三个位点的引物和探针。
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