[发明专利]一种通过改善细胞膜通透性有效生产维生素K2的方法

权利要求书

1.一种通过改善细胞膜通透性有效生产维生素K2的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)菌株活化

将维生素K2生产菌株纳豆芽孢杆菌接种于斜面培养基中进行活化，所述纳豆芽孢杆菌的编号为NKCCMR NK 2.新natto；

(2)一级种子制备

将活化后的维生素K2生产菌株接种于添加有非离子型表面活性剂的种子培养基中培养12-24h，制成一级种子备用；所述非离子型表面活性剂具体为Span、Tween、Triton、OP和POE中的一种；所述步骤(2)中非离子表面活性剂浓度范围0.01-8g/L；

(3)二级种子制备

按照接种量3％-10％将步骤(2)得到的一级种子培养液接种于添加有非离子型表面活性剂的种子培养基中培养12-16h，制成二级种子备用；所述非离子型表面活性剂具体为Span、Tween、Triton、OP和POE中的一种；所述步骤(3)中非离子表面活性剂浓度范围0.01-8g/L；

(4)发酵培养

按装液量40％-70％，接种量1％-15％将二级种子培养液接入发酵培养基中，100-700rpm，0.5-5vvm培养144-240h；发酵至0-72h时，在培养基中添加非离子型表面活性剂，并采用插入式低功率超声间隔处理，定时取样检测细胞和维生素K2浓度，所述步骤(4)中插入式低功率超声间隔处理的超声功率为100-500W，频率为10-30KHz，插入式低功率超声间隔处理的处理时间为发酵24-96h后每隔12-24h超声30-400s，作用3s，间歇4s；所述非离子型表面活性剂具体为Span、Tween、Triton、OP和POE中的一种；所述非离子表面活性剂加入方式是一次性加入、分批加入或流加，浓度范围0.01-50g/L。

2.根据权利要求1所述的通过改善细胞膜通透性有效生产维生素K2的方法，其特征在于，所述步骤(4)中定时取样指每隔6-12h取样一次，直至发酵结束。

3.根据权利要求1所述的通过改善细胞膜通透性有效生产维生素K2的方法，其特征在于，所述步骤(4)中通过分光光度计检测细胞浓度，通过液相色谱仪检测维生素K2浓度。