[发明专利]一种复合酶制剂的生产工艺

说明书

本发明属于酶制剂技术领域，具体涉及一种复合酶制剂的制备工艺；通过孢子培养、种子培养、无花果曲霉和里氏木霉的复合发酵培养、分离纯化稳定等步骤，制备出的复合酶制剂具有良好的酶活性及稳定性，作为添加剂加入猪饲料中，可促进猪对营养物质的吸收利用，减少营养物质随粪便排出，同时该生产工艺流程简单，便于规模化、工业化生产。

技术领域

本发明属于酶制剂技术领域，具体涉及一种复合酶制剂的生产工艺。

背景技术

植酸又称肌酸、环己六醇六全-二氢磷酸盐，它主要存在于植物的种子、根干和茎中，本身是一种很强的螯合剂，在饲料中被采食后，会影响动物对多种矿物质元素、蛋白质的吸收利用；还能抑制蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶的活性，从而影响动物对蛋白质、碳水化合物消化吸收；同时植酸自身含有的磷元素也无法被动物消化吸收，随着粪便排出体外，造成严重的环境污染。

对于单胃动物，本身不具备植酸分解酶，为了增强动物对饲料中各营养元素的吸收利用，需在饲料中添加相应的植酸酶添加剂，但是植酸通常都被包裹在细胞壁内部，常规植酸酶无法高效直接的作用于植酸，需要在纤维素酶的协同作用下，才能发挥植酸酶的作用，而很多动物内源纤维素酶含量不足，需要外加纤维素酶。

无花果曲霉是一种很好的植酸酶生产菌株，其产酶种类齐全，对动物体内pH环境适应性强，但是植酸被包裹在细胞壁内部，植酸酶无法直接分解植酸；里氏木霉的纤维素酶产酶量高，但是产酶的β-葡萄糖苷酶活力较低，分解纤维二糖的能力较弱。

在饲料中同时加入植酸酶和纤维素酶可较好的促进营养物质的吸收，但是来源不同的植酸酶和纤维素酶之间的协同作用较弱，且采用单独发酵的方式分别制备纤维素酶和植酸酶，酶种单一，生产成本高，后期饲料配比麻烦。

发明内容

为了克服背景技术中存在的不足，本发明提供一种复合酶制剂的生产工艺，通过孢子培养、种子培养、复合发酵培养和分离纯化稳定等步骤，制备出的复合酶制剂具有很好的酶活性及稳定性，同时生产成本低，便于工业化的生产利用。

本发明是通过如下技术方案实现的：

所述的一种复合酶制剂的生产工艺采用无花果曲霉(A.ficuum)NRRL3135和里氏木霉混合发酵，经分离纯化得到一种复合酶制剂，其具体步骤包括：

1)无花果曲霉孢子悬浮液制备：将无花果曲霉的菌种接种在固态PAD培养基上，32℃划线培养72～96小时，用无菌水将培养成熟的布满孢子的固态PAD培养基洗涤、震荡，稀释至孢子数为10⁷-10⁸个/ml，得到无花果曲霉孢子悬浮液；

里氏木霉孢子悬浮液制备：将里氏木霉菌种接种在固态PAD培养基上，28℃划线培养20～40小时，用无菌水将培养成熟的布满孢子的固态PAD培养基洗涤、震荡，稀释至孢子数为10⁷-10⁸个/ml，得到里氏木霉孢子悬浮液；

2)无花果曲霉发酵种子液制备：按8-10％的体积接种量将无花果曲霉孢子悬浮液接种到装有种子培养基的一级种子罐内，32℃，180rpm，pH 5-6,溶氧30％-40％，培养24-30小时，得到一级种子；按8-10％的体积接种量将一级种子接种到二级种子罐内，32℃，180rpm，pH 5-6,溶氧30％-40％，培养24-30小时，得到无花果曲霉发酵种子液；

里氏木霉孢子发酵种子液制备：按5-8％的体积接种量将里氏木霉孢子悬浮液接种到装有种子培养基的一级种子罐内，28℃，150rpm，pH 5-6,溶氧20％-30％，培养20-24小时，得到里氏木霉发酵种子液；