[发明专利]一种利用气相色谱-质谱分析方法同时检测糖醛酸和醛糖的方法

说明书

本发明公开了一种利用气相色谱‑质谱分析方法同时检测糖醛酸和醛糖的方法。该方法通过四氢硼钠还原‑六甲基二硅胺烷‑三甲基硅烷体系对样品以及混合单糖标准品溶液中的单糖进行硅醚化衍生，制备得到糖醇和6‑羧基‑糖醇的硅醚化衍生产物，反应产物通过气相色谱‑质谱分析方法(GC‑MS)进行检测，以不同浓度的混合单糖标准品溶液的峰面积与内标峰面积之比为纵坐标，以每种单糖的浓度为横坐标建立标准曲线，用内标法定量样品溶液中糖醛酸和醛糖及其他单糖的含量，该方法简便、快捷、准确，可以用于中药皂苷和中药多糖中单糖组成的检测及分析，且专属性强、重复性好、分离度好，结果可靠。

技术领域

本发明涉及一种检测糖醛酸和醛糖的方法，特别涉及一种利用气相色谱-质谱分析方法同时检测糖醛酸和醛糖的方法。本发明属于化学分析及检测技术领域。

背景技术

在分析方法上，由于糖类化合物极性强、异构体复杂多变、理化性质相似，其成分分离较为困难。虽然文献已经发展了GC-MS检测法将中药多糖单糖组成通过形成甲基酯、乙酰化酯、三氟乙酰化酯、三甲基硅醚酯、三甲基硅醚氧肟、阿尔迪醇乙酸酯、糖腈乙酸酯或二烷基二乙硫醇酯，可以得到很好的分离。但是，本文通过GC-MS检测，首次采用四氢硼钠还原-六甲基二硅胺烷-三甲基氯硅烷的衍生方法，将醛糖和糖醛酸分别制备成糖醇和6-羧基-糖醇的硅醚化衍生产物的同时检测中性醛糖和糖醛酸，并通过单因素考察实验对衍生试剂条件进行了优化。

该方法简便、快捷、准确，可以用于中药皂苷和中药多糖单糖组成的研究，而且该方法已应用于刺五加叶皂苷和麻黄根多糖单糖组成分析。

发明内容

本发明的目的在于提供一种通过利用气相色谱-质谱分析方法(GC-MS检测法)同时检测糖醛酸和醛糖的方法。

为了达到上述目的，本发明采用了以下技术手段：

本发明的一种通过利用气相色谱-质谱分析方法同时检测糖醛酸和醛糖的方法，该方法通过四氢硼钠还原-六甲基二硅胺烷-三甲基硅烷体系对样品以及混合单糖标准品溶液中的单糖进行硅醚化衍生，制备得到醛糖和糖醛酸的硅醚化衍生产物，反应产物通过气相色谱-质谱分析方法(GC-MS)进行检测，以不同浓度的混合单糖标准品溶液的峰面积与内标峰面积之比为纵坐标，以每种单糖的浓度为横坐标建立标准曲线，用内标法定量样品溶液中糖醛酸和醛糖及其他单糖的含量，所述的混合单糖标准品溶液中至少包括一种糖醛酸和一种醛糖。

其中，优选的，气相色谱-质谱分析的色谱条件为：采用Agilent 7890A-5975C气质联用仪，采用DB-5毛细管柱，程序升温，柱温180℃，以4℃/min至190℃，以1℃/min至200℃，以2℃/min至230℃，以20℃/min至310℃，氦气作载气，进样口温度250℃，柱流速1.2mL/min，EI(70eV)，接口温度250℃，离子源温度230℃，扫描范围:m/z50-550，扫描率:2.5scan/s。

其中，优选的，通过四氢硼钠还原-六甲基二硅胺烷-三甲基硅烷体系对样品以及混合单糖标准品溶液中的单糖进行硅醚化衍生的具体操作步骤为：取完全水解后的样品溶液以及混合单糖标准品溶液，分别加入四氢硼钠和氨水，室温静置1-3h，加入冰乙酸，浓缩至干，加入盐酸甲醇溶液中和，浓缩至干，重复几次，直至无酸味，加入吡啶溶解，再加入六甲基二硅胺烷和三甲基氯硅烷，60-100℃水浴，反应10-60min，反应后，加入水，离心，取上层溶液，进行GC-MS分析。

其中，优选的，每1ml样品溶液或混合单糖标准品溶液中，加入10mg四氢硼钠和10μL氨水，室温静置1.5h。

其中，优选的，所述的盐酸甲醇溶液为1％(v/v)的盐酸甲醇溶液。

其中，优选的，所述的六甲基二硅胺烷与三甲基氯硅烷的体积比为3:1。

其中，优选的，加入六甲基二硅胺烷和三甲基氯硅烷后，70℃水浴，反应30min。