[发明专利]一种板栗菌根菌人工培养方法

权利要求书

1.一种板栗菌根菌人工培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)组织分离

取板栗菌根菌子实体，纵切为两半，采集菌盖与菌柄交汇处的菌肉组织块；

2)菌丝培养与提纯

将采集的菌肉组织块置于斜面培养基中，在25～28℃下培养至菌肉组织块萌发出菌丝后，将菌丝转接至斜面培养基中，在25～28℃下培养至菌丝长满斜面，获得纯菌丝；所述的斜面培养基的制作为：首先，用沸水煮马铃薯后过滤，回收滤液得到马铃薯汁液；其次，将板栗枯枝落叶水煮液、根际土壤水提液和水加入马铃薯汁液中后，加入琼脂，边加热边搅拌至琼脂完全融化后，再加入葡萄糖，充分混匀后冷却；最后，调节pH值为5～6；其中，马铃薯、葡萄糖和琼脂的质量比为(10～20)：(1～2)：(1～1.5)，板栗枯枝落叶水煮液、根际土壤水提液和水的体积比为(2～5)：(1～2)：(2～5)；

3)菌种扩大培养

将纯菌丝接种到扩大培养料中，在25～28℃下培养至菌丝长满培养容器，获得板栗菌根菌；所述的扩大培养料由基质和营养液按质量比10:2～3配成，且扩大培养料的含水质量为60～65％；其中，所述基质由板栗修剪枝条或栗苞的粉碎物与玉米粉按体积比(80～85):(20～15)混匀配成；所述营养液由水、白糖、KH2PO4、NH4Cl、CaSO4·2H2O、FeCl3按质量比80:10:3:5:1:1配制而成，调节pH值为5～6。

2.根据权利要求1所述的一种板栗菌根菌人工培养方法，其特征在于，所述的用沸水煮马铃薯的时间为30～50min；采用1mol/L NaOH或1mol/LHCL调节pH值为5～6。

3.根据权利要求1所述的一种板栗菌根菌人工培养方法，其特征在于，所述板栗枯枝落叶水煮液为：用沸水煮板栗枯枝落叶30～50min，静置后过滤得到的滤液。

4.根据权利要求1所述的一种板栗菌根菌人工培养方法，其特征在于，所述根际土壤水提液为：用沸水煮板栗根际土壤30～50min，静置后过滤得到的滤液。

5.根据权利要求1所述的一种板栗菌根菌人工培养方法，其特征在于，所述的板栗菌根菌子实体在组织分离前还包括预处理操作，是将采集的新鲜、壮实、中等成熟的野生板栗菌根菌子实体，先经无菌保鲜剂洗涤，再经75％的酒精浸泡消毒，最后经无菌水清洗。

6.根据权利要求5所述的一种板栗菌根菌人工培养方法，其特征在于，所述的无菌保鲜剂为：质量浓度为0.02～0.06％的抗坏血酸液和质量浓度为0.01～0.03％的柠檬酸液按体积比(1～5):(1～3)配成的混合液。