[发明专利]一种基于单引物探针捕获检测微生物目标序列的方法

权利要求书

1.一种基于单引物探针捕获检测微生物目标序列的方法，其特征在于，所述方法包括：

将包含微生物目标序列的DNA样本片段化，然后进行末端修复；

将末端修复后的DNA片段连接接头；

使用单引物探针与靶序列的探针结合位点退火并延伸以进行靶序列捕获，其中所述探针结合位点位于所述靶序列的上游或下游，所述单引物探针包括探针序列部分和位于所述探针序列部分5’端的公共序列部分，其中所述探针序列部分用于与所述探针结合位点退火，所述公共序列部分用作通用PCR引物的结合位点，所述探针序列部分的长度是35-40bp；

使用一对通用PCR引物对捕获的靶序列进行扩增，得到扩增产物；

对所述扩增产物进行测序分析，获得目标序列的序列信息。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述DNA样本片段化至150bp-300bp小片段。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述接头包含标签序列。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述接头进一步包含一段随机序列，所述随机序列与所述标签序列相邻。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述单引物探针经梯度退火与所述探针结合位点结合。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述梯度退火是从80℃开始梯度降温至60℃。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述接头的序列是SEQ ID NO：5和SEQ IDNO：6。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述测序平台公共接头序列部分的序列是SEQ ID NO：7。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述测序平台通用PCR引物的序列是SEQID NO：8和SEQ ID NO：9。