[发明专利]一种MYLK4基因辅助检测牛生长性状的方法及其专用试剂盒

说明书

本发明公开了一种MYLK4基因辅助检测牛生长性状的方法及其专用试剂盒。以黄牛基因组DNA为模板，以引物对P为引物，PCR扩增获得黄牛MYLK4基因；PCR产物经限制性内切酶HhaI消化后，进行琼脂糖凝胶电泳；根据电泳结果鉴定黄牛MYLK4基因第61595位的单核苷酸多态性。本发明所阐述的方法能够检测黄牛MYLK4基因的单核苷酸多态性，可作为与牛生长性状密切相关分子遗传标记，用于牛的辅助选择和分子育种，加快良种牛繁育速度。

技术领域

本发明属于分子遗传学领域，涉及黄牛基因单核苷酸多态性(SNP)作为分子遗传标记的筛选与检测，特别涉及一种检测黄牛MYLK4基因单核苷酸多态性的方法及应用。

背景技术

所谓分子遗传标记，也就是DNA水平上遗传多态性的标记，它可以直接反映DNA序列上的遗传变异。因为其来源为DNA序列的差异，所以又叫分子标记，其在生物群体中具有遗传多样性高、稳定性强且受环境影响小的特点。分子标记辅助选择育种是现代动物分子育种的一项主要研究内容，其直接在DNA水平上对性状的基因型进行选择，因此其选种的准确性大大提高，克服了传统动物育种方法的缺陷。

单核苷酸多态性(SNP)是一种重要的分子遗传标记，主要是指由于DNA序列中某个核苷酸的改变而引起的基因组水平上的序列多态性，形式主要为单个核苷酸的转换及颠换。SNP同其它分子标记相比，有覆盖基因组范围大、密度高、分辨率高、遗传稳定和易实现分析自动化等优点。因此被广泛地应用于生物学、植物学、医学、动物育种、生物进化等研究领域。

自从Botestein等第一次提出了DNA限制性片段长度多态性的相关概念后，PCR-RFLP法就在SNP的检测中被大量使用。应用此方法的前提是SNP的位点必须含有合适的限制性内切酶识别的位点。利用限制性内切酶对目的片段进行切割，然后进行凝胶电泳分析，就能准确的鉴别SNP位点的基因型，是最经典的方法之一。

肌球蛋白(myosin)是构成肌肉的重要蛋白，它是由两条重链(heavy chain)，两条必需轻链(essential light chain)和两条调节轻链(regulatory light chain，RLC)组成的六聚体。肌球蛋白具有ATP酶活性，与ATP结合后能够使其构象发生改变从而驱使肌丝滑动，引起肌肉的收缩。而肌球蛋白轻链激酶(myosin light chain kinase，MYLK)能够使肌球蛋白调节轻链(RLC)磷酸化，从而激活或调节肌球蛋白ATP酶活性。研究表明，MYLK与细胞骨架改变有关，进而可能调节细胞的运动、分泌活动、上皮细胞通透性改变和血小板形态的改变；它还能促进轴突生长锥的伸长和细胞张力纤维的发生，进而影响胞质分裂和细胞的凋亡、修复。在生命活动和生长发育过程中发挥着重要作用。

而MYLK4是MYLK家族成员之一，它是一种Ca2+/CaM非依赖性的组成型活性激酶。研究发现它可能是心肌细胞中RLC磷酸化的重要贡献者。目前，国内外对MYLK4基因多态性的研究主要集中于其与心血管疾病、肿瘤等的关联性研究，而对于家畜MYLK4基因单核苷酸多态性的研究尚未见报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种MYLK4基因辅助检测牛生长性状的方法及其专用试剂盒。

为达到上述目的，本发明采用了以下技术方案：

一种黄牛MYLK4基因单核苷酸多态性的检测方法，包括以下步骤：

以黄牛基因组DNA为模板，以引物对P为引物，PCR扩增黄牛MYLK4基因部分片段，将PCR扩增产物经限制性内切酶HhaI消化后，进行琼脂糖凝胶电泳，根据电泳结果鉴定黄牛MYLK4基因第61595位单核苷酸多态性位点的基因型；

所述引物对P的序列为：

上游引物F：5’-CGGACACTTGTTCTCAATCGGC-3’

下游引物R：5’-GTGGTCTAGGAATCTGGGTG-3’。