[发明专利]一种氟甲喹的手性对映体的检测方法

说明书

本发明提供了一种氟甲喹的手性对映体的检测方法，该检测方法可以实现氟甲喹手性对映体的拆分，且该方法既可应用于沉积物的检测，也可应用于河或池塘水的检测。在1.0μg/L至200μg/L的浓度范围呈现良好的线性关系，在河水样或池塘水样中，S‑(‑)‑氟甲喹和R‑(+)‑氟甲喹的检测限(LOD)值为2.5μg/kg，定量限(LOQ)值为8.0μg/kg；沉积物样品中，两个对映体的LOD和LOQ值分别为5μg/kg和15μg/kg；河水样或池塘水样中S‑(‑)‑氟甲喹和R‑(+)‑氟甲喹的回收率为81.0‑82.8％，沉积物样品中两个对映体的回收率为73.6‑77.5％。

1、技术领域

本发明涉及一种氟甲喹的手性对映体的检测方法，具体涉及一种沉积物、河水或池塘水样品中氟甲喹的手性对映体的检测。

2、背景技术

近年来抗生素的大量使用已经导致其在环境中的残留，在地球的各种环境中都检测到了残留的人类或兽用抗生素，这些抗生素最终会给陆地和水中的各种生物带来潜在的危险。

氟甲喹(Flumequine，FMQ)为第二代氟喹诺酮类广谱抗菌药物，其主要作用于DNA转旋酶A亚单位，抑制其活性，从而使得脱氧核糖核酸、核糖核酸以及蛋白质的合成受阻，阻止细菌细胞分裂以达到杀菌药效。氟甲喹结构式中含有一个手性碳原子，因此含有一对手性对映体，对映体结构如下式I所示。

式I氟甲喹对映体结构式

手性对映体往往会表现出不同的生物活性和环境行为。手性药物在生物体内往往存在立体选择性，对映体浸入生物体后与血浆蛋白、转运蛋白以及其他具有立体特异性代谢酶作用，引起对映体毒性、代谢途径、生物活性的差异，有的对映体活性较强，可达到理想作用，其他对映体活性不高甚至对机体产生毒性作用。

由于氟甲喹具有抗菌谱广、与其他类抗生素药物没有交叉耐药性特点，已广泛应用于水产养殖中，然而氟甲喹在水生生物体内的生物利用度很低，在养殖水体及底泥中的降解也很慢，加之过度使用，已经导致了氟甲喹的残留。

发明专利CN201410459726.1公开了一种海水中氟甲喹手性对映体的检测方法，但该方法仅能应用于海水中氟甲喹手性对映体的检测，且在检测时需要在流动相中加入添加剂。

3、发明内容

本发明提供了一种氟甲喹对映体的检测方法，该方法可以实现氟甲喹手性对映体的拆分，且该方法既可应用于沉积物的检测，也可应用于河水或池塘水的检测。

本发明要求保护一种氟甲喹对映体的检测方法，检测步骤为：

(1)将沉积物、河水或池塘水样品进行前处理，待净化；

(2)将Cleanert PEP固相萃取小柱(150mg/6mL)进行活化，将上述待净化液上样于Cleanert PEP(150mg/6mL)固相萃取小柱上，弃去流出液，再用6mL 5％甲醇水溶液淋洗，弃去流出液，抽干小柱，再用洗脱剂进行洗脱，收集流出液于45℃下氮吹至干，用流动相定容至1mL，过0.45μm Nylon针式过滤器过滤，待检测；

(3)使用Lux 5μm Cellulose-2(250mm×4.6mm i.d.×5μm,Phenomenex,USA)手性柱，以0.2％甲酸水为流动相A，乙腈为流动相B，进行梯度洗脱，流速为1mL/min，运行时间为30min，柱温30℃，进样体积为1μL，Q-TOF检测为电喷雾离子源，雾化器压力为55psi，碰撞能量10V，毛细管电压5.5kV，离子温度600℃，质量范围m/z 100-700。

所述的沉积物样品的前处理方法为：称取样品，加入提取液，涡旋1min，超声提取10min，8000rpm离心5min，转移上清液，残渣再重复上述操作提取2次，合并3次上清液，45℃旋蒸至15mL左右，加水稀释至30mL，混匀，待净化。