[发明专利]一种系统性红斑狼疮动物模型的构建方法及其应用

权利要求书

1.一种系统性红斑狼疮动物模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)提取处于凋亡状态下的淋巴细胞DNA；

(2)制备小鼠骨髓单细胞悬液；

(3)树突状细胞的诱导分化；

(4)树突状细胞体外包被处于凋亡状态下的淋巴细胞DNA；

(5)将步骤(4)中制得的体外包被有处于凋亡状态下的淋巴细胞DNA的树突状细胞注射到小鼠体内；

(6)监测小鼠系统性红斑狼疮的发病状况。

2.如权利要求1所述系统性红斑狼疮动物模型的构建方法，其特征在于，所述步骤(2)中，制备小鼠骨髓单细胞悬液的方法为：处死小鼠，分离小鼠的股骨和胫骨各两根，剪断骨骺端，吹散骨髓细胞，离心，裂解红细胞后，用完全培养基重悬，得到小鼠骨髓单细胞悬液。

3.如权利要求1所述系统性红斑狼疮动物模型的构建方法，其特征在于，所述步骤(3)中，树突状细胞的诱导分化的方法为：向步骤(2)中得到的小鼠骨髓单细胞悬液中添加细胞因子，因子进行细胞诱导分化培养，换液，待树突状细胞成熟后进行收集，检测树突状细胞的阳性率。

4.如权利要求3所述系统性红斑狼疮动物模型的构建方法，其特征在于，添加的细胞因子为重组细胞因子粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和白细胞介素4，其中粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子的工作浓度为50ng/ml，白细胞介素4的工作浓度为2.5ng/ml。

5.如权利要求1所述系统性红斑狼疮动物模型的构建方法，其特征在于，所述步骤(4)中，树突状细胞体外包被处于凋亡状态下的淋巴细胞DNA的方法为：将步骤(3)中经过诱导分化的树突状细胞树突状细胞与步骤(1)中处于凋亡状态下的淋巴细胞DNA共孵育12小时，收集共孵育后的细胞，经过洗涤后置于冰上保存。

6.如权利要求1所述系统性红斑狼疮动物模型的构建方法，其特征在于，所述步骤(5)中，注射方法为：用PBS重悬树突状细胞后，尾静脉注射到小鼠体内，每只小鼠注射的细胞数目为5×10⁵,注射体积为200μL。

7.如权利要求1所述系统性红斑狼疮动物模型的构建方法，其特征在于，所述步骤(6)中，监测小鼠系统性红斑狼疮的发病状况的方法为：对小鼠进行眼眶取血分离血清，ELISA检测小鼠血清中自身抗体水平。

8.如权利要求1所述系统性红斑狼疮动物模型的构建方法，其特征在于，所述步骤(6)中，监测小鼠系统性红斑狼疮的发病状况的方法为：对小鼠进行蛋白尿的测定，观测小鼠肾脏有无病损。

9.如权利要求1所述系统性红斑狼疮动物模型的构建方法，其特征在于，所述步骤(6)中，监测小鼠系统性红斑狼疮的发病状况的方法为：处死小鼠，取小鼠淋巴组织脾脏和颈部淋巴结分别进行观察并称重。

10.如权利要求1所述系统性红斑狼疮动物模型的构建方法，其特征在于，所述步骤(6)中，监测小鼠系统性红斑狼疮的发病状况的方法为：处死小鼠，取小鼠肾脏组织，切片后做组织化学染色，观察小鼠炎症症状的改变。

11.根据权利要求1-10任一项所述方法构建的系统性红斑狼疮动物模型在系统性红斑狼疮的机理研究方面的应用。