[发明专利]一种减少抗猪圆环病毒多克隆抗体中非特异性抗体的方法

说明书

本发明公开了一种减少抗猪圆环病毒多克隆抗体中非特异性抗体的方法，具体为：通过应用PK‑15细胞碎片及由不同动物血清包被的ELISA板与抗猪圆环病毒多克隆抗体在常温下培育，使抗猪圆环病毒多克隆抗体中的非特异性抗体与PK‑15细胞碎片及ELISA板中的抗原相结合，进而除去抗猪圆环病毒多克隆抗体中的部分非特异性抗体。本发明的方法可以有效降低抗猪圆环病毒多克隆抗体中的非特异性抗体含量。

技术领域

本发明属于兽用生物制品行业，涉及一种减少抗猪圆环病毒多克隆抗体中非特异性抗体的方法。

背景技术

现有技术中抗猪圆环病毒多克隆抗体的制备主要采用猪圆环病毒作为抗原刺激机体，使机体通过免疫学反应，合成并分泌与抗原有特异性结合能力抗体，进而产生抗猪圆环病毒多克隆抗体。但动物在生长的过程中会接触或感染无数种微生物，而这些微生物都会刺激机体产生对猪圆环病毒具有非特异性的抗体，导致通过感染机体得到的抗猪圆环病毒多克隆抗体中具有多种非特异性抗体，降低抗猪圆环病毒多克隆抗体中特异性抗体含量，进而导致多克隆抗体会与不同抗原具有非常强的交叉反应，影响抗猪圆环病毒多克隆抗体在生物实验中的应用。因此，如何减少抗猪圆环病毒多克隆抗体中非特异性抗体对于抗猪圆环病毒多克隆抗体的应用非常重要。

发明内容

本发明提供了一种减少抗猪圆环病毒多克隆抗体中非特异性抗体的方法，以解决现有技术中抗猪圆环病毒的多克隆抗体中非特异性抗体含量过多的问题。

本发明的具体技术方案如下，一种减少抗猪圆环病毒多克隆抗体中非特异性抗体的方法，包括以下步骤：

步骤一：获取PK-15细胞碎片；

步骤二：分别使用血清含量为1-10vol％的鸡血清包被液、牛血清包被液、羊血清包被液、猪血清包被液、小鼠血清包被液、大鼠血清包被液、兔血清包被液包被ELISA板，洗涤后，分别得到包被鸡血清、牛血清、羊血清、猪血清、小鼠血清、大鼠血清、兔血清的ELISA板；

步骤三：稀释抗猪圆环病毒多克隆抗体；

步骤四：取稀释后的抗猪圆环病毒多克隆抗体与PK-15细胞碎片培育结合，离心，收集上清液；

步骤五：将步骤四所获得的上清液加入到步骤二所获得的包被血清的ELISA板中的一种中，培育后收集ELISA板中液体；

步骤六：将步骤五所获得的液体加入到剩下的包被血清的ELISA板中的一种中，培育后收集ELISA板中液体，重复步骤六，直到液体与所有的包被血清的ELISA板均进行过接触培育，最终收集到的液体即为减少了非特异性抗体的抗猪圆环病毒多克隆抗体。

进一步地，步骤一中PK-15细胞碎片通过以下方式获取：待PK-15细胞生长致密后，去除培养基，消化，1500-3000rpm/min离心后去上清，加入PBS溶液反复冻融后8000rpm/min离心，去上清液，从而获得PK-15的细胞碎片。

进一步地，步骤二中血清包被液中血清含量为4-8vol％，且包被后的ELISA板使用含有0.05％吐温的PBS溶液洗涤3次。

进一步地，步骤二中血清包被液中血清含量为5-7vol％。

进一步地，步骤三中使用含有0.005-0.1vol％吐温-20的PBS溶液稀释抗猪圆环病毒多克隆抗体，稀释比例为5-40倍。

进一步地，步骤三中吐温-20的含量为0.005-0.05vol％，稀释比例为10-20倍。

进一步地，步骤四中培育结合温度为常温，培育结合时间为1-5h，离心转速为8000rpm/min，离心时间为10-30min。

进一步地，步骤五和步骤六中，培育温度为常温，培育时间为2-5h。

进一步地，步骤五和步骤六中培育时间不低于2h。