[发明专利]一种减少抗猪圆环病毒多克隆抗体中非特异性抗体的方法

权利要求书

1.一种减少抗猪圆环病毒多克隆抗体中非特异性抗体的方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一：获取PK-15细胞碎片；

步骤二：分别使用血清含量为1-10vol％的鸡血清包被液、牛血清包被液、羊血清包被液、猪血清包被液、小鼠血清包被液、大鼠血清包被液、兔血清包被液包被ELISA板，洗涤后，分别得到包被鸡血清、牛血清、羊血清、猪血清、小鼠血清、大鼠血清、兔血清的ELISA板；

步骤三：稀释抗猪圆环病毒多克隆抗体；

步骤四：取稀释后的抗猪圆环病毒多克隆抗体与PK-15细胞碎片培育结合，离心，收集上清液；

步骤五：将步骤四所获得的上清液加入到步骤二所获得的包被血清的ELISA板中的一种中，培育后收集ELISA板中液体；

步骤六：将步骤五所获得的液体加入到剩下的包被血清的ELISA板中的一种中，培育后收集ELISA板中液体，重复步骤六，直到液体与所有的包被血清的ELISA板均进行过接触培育，最终收集到的液体即为减少了非特异性抗体的抗猪圆环病毒多克隆抗体。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤一中PK-15细胞碎片通过以下方式获取：待PK-15细胞生长致密后，去除培养基，消化，1500-3000rpm/min离心后去上清，加入PBS溶液反复冻融后8000rpm/min离心，去上清液，从而获得PK-15的细胞碎片。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤二中血清包被液中血清含量为4-8vol％，且包被后的ELISA板使用含有0.05％吐温的PBS溶液洗涤3次。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述血清包被液中血清含量为5-7vol％。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤三中使用含有0.005-0.1vol％吐温-20的PBS溶液稀释抗猪圆环病毒多克隆抗体，稀释比例为5-40倍。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，吐温-20的含量为0.005-0.05vol％，稀释比例为10-20倍。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤四中培育结合温度为常温，培育结合时间为1-5h，离心转速为8000rpm/min，离心时间为10-30min。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤五和步骤六中，培育温度为常温，培育时间为2-5h。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，培育时间不低于2h。

10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤二中的血清包被液中含有碳酸盐0.05mol/L，pH值为9-10。