[发明专利]一种快速检测鉴定水稻潜根线虫的LAMP引物和方法

权利要求书

1.一种快速检测水稻潜根线虫的LAMP引物组在检测水稻潜根线虫的应用，其特征在于，所述LAMP引物组由外引物对Ho-F3和Ho-B3，以及内引物对Ho-FIP和Ho-BIP组成，

Ho-F3的序列为：5’-ATCTTGTCCTTTGGCACG-3’，

Ho-B3的序列为：5’-CGGTTGAACAAACAACGT-3’，

Ho-FIP的序列为：5’-CAGCATAGCAACAGAATGAATTCACGGTCGTAAACCTAATACGCG-3’，

Ho-BIP的序列为：5’-TTGTACTACAATGGATTGTTTTCGCCTGATCCATCCACCCATG-3’。

2.权利要求1所述LAMP引物组在制备水稻潜根线虫的检测试剂盒中的应用。

3.一种快速检测水稻潜根线虫的LAMP方法，其特征在于，以待测样本DNA为模板，利用权利要求1所述LAMP引物组进行LAMP扩增；所述LAMP扩增的反应体系为：10×ThermopolBuffer 2.5μL、引物25倍混合液2μL、10 mmol/L dNTPs 3.5μL、100 mmol/L MgSO₄ 1.5μL、8U/μLBst DNA聚合酶1μL、模板DNA 1μL、ddH₂O补足25μL；其中，引物25倍混合液为40μM引物Ho-FIP、40μM引物Ho-BIP、5μM引物Ho-F3、5μM引物Ho-B3；所述LAMP扩增的反应条件为：57℃温育45 min，85℃保温5 min。

4.根据权利要求3所述的LAMP方法，其特征在于，LAMP扩增的结果判定方法为琼脂糖凝胶电泳法或SYBR Green I染色目测法：所述琼脂糖凝胶电泳法为：将LAMP扩增产物使用1%琼脂糖凝胶5～10 V/cm电压下电泳25 min，若出现LAMP特征性阶梯状条带，则判定为样本中有水稻潜根线虫；所述SYBR Green I染色目测法为：在 LAMP 扩增产物中加入SYBRGreen I染料，若观察到绿色荧光，判定为样本中有水稻潜根线虫。

5.一种快速检测水稻潜根线虫的LAMP试剂盒，其特征在于，包含有权利要求1所述LAMP引物组。

6.根据权利要求5所述LAMP试剂盒，其特征在于，还含有SYBR Green I染料。

7.根据权利要求6所述LAMP试剂盒，其特征在于，还含有10×Thermopol Buffer、10mmol/L dNTPs、100 mmol/L MgSO₄、8U/μLBst DNA 聚合酶、ddH₂O。