[发明专利]一种细胞中内源性表达RNA聚合酶的核酸构建物

权利要求书

1.一种体外无细胞蛋白合成体系，至少包含:

（a）乳酸克鲁维酵母细胞提取物；

用于制备所述乳酸克鲁维酵母细胞提取物的菌株为经基因改造

的乳酸克鲁维酵母菌株，所述基因改造包括：将所述菌株中的KlXRN1敲除并替换为 T7RNA表达盒；

其中，

所述 T7 RNA表达盒含有式（I）所示核酸构建物：

Z1-Z2 (I)

式中，

Z1、Z2 分别为用于构成所述构建物的元件；

各“-”独立地为键或核苷酸连接序列；

Z1 为启动子元件，所述启动子元件为 ScRNR2；

所述 Z2 为 T7 RNA 聚合酶的编码序列；

（b）聚乙二醇；

（c）任选的外源蔗糖；

（d）任选的溶剂，所述溶剂为水或水性溶剂；

（e）核苷三磷酸混合物；

（f）氨基酸混合物；

（g）磷酸肌酸和磷酸肌酸激酶；

（h）不含外源 RNA 聚合酶；

所述体外无细胞蛋白合成体系能够与编码外源蛋白的 DNA 模板反应，合成所述外源蛋白。

2.一种体外高通量合成外源蛋白的方法，包括步骤：

(i) 提供权利要求 1 所述的体外无细胞蛋白合成体系；

(ii) 在适合的条件下，添加外源蛋白核苷酸序列，孵育步骤(i)

的体外无细胞蛋白合成体系一段时间 T1，从而合成所述外源蛋白。

3. 根据权利要求 2 所述的方法，其特征在于，还包括步骤：(iii)

任选地从所述体外无细胞蛋白合成体系中，分离或检测所述外源蛋白。