[发明专利]一种人源铜锌超氧化物歧化酶的制备方法

权利要求书

1. 一种用于构建人源铜锌超氧化物歧化酶重组载体的核苷酸序列，其特征在于，该序列包括在人源铜锌超氧化物歧化酶N末端添加His-TEV标签，该序列如SEQ ID NO.2所示。

2. 一种人源铜锌超氧化物歧化酶的制备方法，其特征在于，将SEQ ID NO.2所示的序列通过人工合成的方式插入原始载体，构建重组载体，扩大培养后提取表达产物，N-His-TEV-hSOD1酶解，纯化得到无标签的hSOD1。

3.根据权利要求2所述的人源铜锌超氧化物歧化酶的制备方法，其特征在于，所述原始载体为真核表达载体或原核表达载体。

4.根据权利要求3所述的人源铜锌超氧化物歧化酶的制备方法，其特征在于，所述原始载体为pET28a。

5.根据权利要求2所述的人源铜锌超氧化物歧化酶的制备方法，其特征在于，N-His-TEV-hSOD1酶解采用TEV蛋白酶。

6.根据权利要求2所述的人源铜锌超氧化物歧化酶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）将SEQ ID NO.2的序列以人工合成的方式插入原始载体中，以构建重组载体；

（2）将重组载体导入表达菌株，得到重组菌株；

（3）将重组菌株扩大培养；

（4）将菌体破碎，离心得到上清液；

（5）将上清液纯化，得到纯化后带标签的N-His-TEV-hSOD1；

（6）将N-His-TEV-hSOD1酶解，得到切除标签的酶液；

（7）将切除标签的酶液纯化，得到纯化后的无标签的hSOD1。

7.根据权利要求6所述的人源铜锌超氧化物歧化酶的制备方法，其特征在于，步骤（2）中表达菌株为大肠杆菌，优选大肠杆菌Codonplus。

8.根据权利要求6所述的人源铜锌超氧化物歧化酶的制备方法，其特征在于，步骤（3）中重组菌株扩大培养中还加入了铜离子和锌离子。

9. 根据权利要求6所述的人源铜锌超氧化物歧化酶的制备方法，其特征在于，步骤（3）中重组菌株扩大培养过程为将重组菌株 在25~37℃、含10~50μg/mL卡那霉素和10~50μg/mL氯霉素的LB培养基中培养至 OD₆₀₀达0.4~1.0，加入终浓度为 0.1-1.0mM 的 IPTG，在 15~42℃下诱导 4~16 小时，离心收集菌体。

10. 根据权利要求9所述的人源铜锌超氧化物歧化酶的制备方法，其特征在于，培养至OD₆₀₀达0.4~1.0，加入终浓度为 0.1-1.0mM 的 IPTG，同时分别加入500μM以内的 Cu²⁺和Zn²⁺，诱导温度为15~42℃，诱导时间为4~16小时。