[发明专利]一种利用秀丽隐杆线虫筛选抗泛耐药鲍曼不动杆菌药物的方法

说明书

本发明公开了一种利用秀丽隐杆线虫筛选抗泛耐药鲍曼不动杆菌药物的方法。首先构建用于筛选组合物药效的秀丽隐杆线虫‑泛耐药鲍曼不动杆菌感染模型，所述秀丽隐杆线虫具有glp‑4;sek‑1双基因突变；秀丽隐杆线虫‑泛耐药鲍曼不动杆菌共培养的培养基组成为20%BHI+5～20μM萘啶酸+5～20μg/ml FeCl₃；泛耐药鲍曼不动杆菌浓度为1×10⁶～1×10⁹CFU/mL；细菌感染秀丽隐杆线虫的时长为6～12h；药物治疗感染模型的时长为24～48h。所述模型可用于快速高通量筛选各类化合物或药物或组合物的体内抗菌活性，相比体内动物感染模型，具有制备成本低，周期短，操作简易的巨大优点。相比体外模型，可以筛选排除体内毒性大，代谢差和体内外相关性低的化合物。

技术领域

本发明属于生物技术领域。更具体地，涉及一种利用秀丽隐杆线虫筛选抗泛耐药鲍曼不动杆菌药物的方法。

背景技术

鲍曼不动杆菌（Acinetobacter baumannii）是一类非发酵型革兰阴性杆菌，广泛存在于自然界和医院环境中，是引起院内感染最常见的条件致病菌之一。鲍曼不动杆菌可引起包括呼吸道感染、泌尿系统感染、呼吸道感染、菌血症、伤口感染、脑膜炎和呼吸机相关性肺炎等在内的多种感染性疾病，随着抗菌药物在临床中的广泛使用，该菌对常用抗生素产生了极大的耐药性，甚至出现了多重耐药（对常用抗菌药物主要分类的3类或以上耐药）的鲍曼不动杆菌（MDR-AB）和广泛耐药（革兰氏阴性杆菌仅对多粘菌素和替加环素敏感）的鲍曼不动杆菌（XDR-AB），给临床治疗带来极大的挑战。

鲍曼不动杆菌的耐药性是通过多种耐药机制介导的，其中细菌主动外排泵的过度表达可使抗菌药物不能在细胞内蓄积达到作用浓度，是耐药性产生的一个重要途径。在不动杆菌属中，耐药结节分化（resistance-nodulation-division，RND）家族对细菌耐药性的产生有重要作用，其中AdeABC、AdeIJK、AdeFGH外排系统主要存在于鲍曼不动杆菌，可外排多种抗菌药物如喹诺酮类、氨基糖苷类、四环素、红霉素等引起耐药。喹诺酮类药物如环丙沙星，曾作为治疗鲍曼不动杆菌感染的一线抗菌药物，但由于鲍曼对其产生了广泛的耐药性而导致临床已基本摒弃环丙沙星用于治疗耐药鲍曼不动杆菌。研究发现，鲍曼不动杆菌对环丙沙星的耐药机制主要是外排泵的过度表达，将环丙沙星合用外排泵抑制剂（effluxpump inhibitors，EPIs）使其重新对耐药菌株发挥作用，已成为治疗鲍曼不动杆菌感染的潜在有效途径。

目前关于EPIs的研究多局限于体外实验，不同的EPIs在体内能否逆转鲍曼不动杆菌的耐药性达到较好的抑菌效果，是否会产生较大的毒性影响使用是目前EPIs应用的主要问题，亟待通过体内实验研究解决。线虫能够提供相对完整的实验动物模型，又可避免小鼠模型的高价、耗时的缺点，因此可大幅降低药物筛选的成本，是用于大规模药物筛选的理想系统，近年来越来越多地受到科学家们的青睐。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服现有技术中抗泛耐药鲍曼不动杆菌药物及外排泵抑制剂研究存在的缺陷和不足，通过建立秀丽隐杆线虫-泛耐药鲍曼不动杆菌感染模型，将环丙沙星联合多种外排泵抑制剂应用于此体内感染模型中，筛选对泛耐药鲍曼不动杆菌有效的组合药物，为泛耐药鲍曼不动杆菌的临床治疗提供新的方法和思路。

本发明的目的是提供一种用于药物筛选的秀丽隐杆线虫-泛耐药鲍曼不动杆菌感染模型。

本发明的另一目的是提供利用所述模型筛选抗泛耐药鲍曼不动杆菌药物的方法。

本发明的上述目的是通过以下技术方案给予实现的：