[发明专利]一种磁性纳米材料介导的CRISPR/Cas9 T细胞内递送系统及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种磁性纳米材料介导的CRISPR/Cas9 T细胞内递送系统的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）采用阳离子聚合物对一定大小的磁性纳米颗粒团簇进行修饰获得一种纳米载体，所述磁性纳米颗粒团簇的粒径为50~200 nm，所述磁性纳米颗粒选自：Fe₃O₄纳米颗粒，γ-Fe₂O₃纳米颗粒或CoFe₂O₄纳米颗粒；

2）提供靶向目标基因的CRISPR/Cas9系统表达质粒，所述的靶向目标基因的CRISPR/Cas9系统包括表达Cas9蛋白和/或sgRNA的质粒，其中，表达Cas9蛋白的质粒有pMJ920和pCAG-T3-hCAS-pA，表达sgRNA的质粒有SP6-sgRNA-scaffold，Cas9蛋白和sgRNA共表达质粒有pX330、pX458或pX459；

3）将步骤1）所得纳米载体与所述靶向目标基因的CRISPR/Cas9系统表达质粒共孵育获得一种纳米复合物；以及

4）在磁场作用下，将步骤3）所得纳米复合物与T细胞共孵育，制得一种磁性纳米材料介导的CRISPR/Cas9 T细胞内递送系统，其中，所述的T细胞包括：CD4⁺T 细胞、CD8⁺T细胞、NKT细胞的原代T细胞，或Jurkat T细胞株。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤4）中的磁场包括均匀磁场和非均匀磁场。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤1）中所述的阳离子聚合物选自：聚丙烯氯化铵、L-多聚赖氨酸、D-多聚赖氨酸、聚乙烯亚胺、聚甲基丙烯酸二甲氨基乙酯、阳离子聚丙烯酰胺、聚乙二醇或壳聚糖中的一种。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述纳米载体与所述靶向目标基因的CRISPR/Cas9系统表达质粒孵育的质量比例为：10:1~30:1，孵育的时间为：10~30 min，孵育的温度为25~37°C。

5.一种根据权利要求1-4中任意一项所述的制备方法制得的磁性纳米材料介导的CRISPR/Cas9 T细胞内递送系统。

6.一种根据权利要求5所述的磁性纳米材料介导的CRISPR/Cas9 T细胞内递送系统在非治疗目的的T细胞目的基因编辑中的应用。