[发明专利]一种RNA circEPSTI1及其在三阴乳腺癌上的应用

说明书

本发明涉及乳腺癌诊断技术领域，具体公开了一种RNA circEPSTI1及其在三阴乳腺癌上的应用；本发明先收集待测疑似三阴乳腺癌组织标本，抽提总RNA，以总RNA为模板将环状RNA circEPSTI1(hsa_circRNA_000479)特异性逆转录成cDNA，再用特异性PCR引物进行实时定量PCR扩增，以β‑actin作为内参基因，获得circEPSTI1相对定量ΔCT值，当ΔCT≤5.52时提示circEPSTI1表达阳性。本发明通过相对定量的检测疑似三阴乳腺癌组织标本中circEPSTI1表达状况，用于三阴乳腺癌病人预后预测中的应用。

技术领域

本发明涉及乳腺癌诊断技术领域，具体公开了一种小分子非编码环状RNAcircEPSTI1及其在三阴乳腺癌上的应用。

背景技术

乳腺癌是全世界发病率最高的女性恶性肿瘤。中国作为人口大国和独特的老龄化社会形态，乳腺癌发病率增长速度高于其他国家，形势不容乐观。乳腺癌至今仍没有得到充分有效的控制，乳腺癌仍然呈现较高的死亡率，主要原因是其复发和转移，乳腺癌一旦发生转移，平均存活率大概只有4-5年。三阴乳腺癌是指雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）和人类表皮生长因子受体-2（HER-2）表达均阴性的乳腺癌，占整个乳腺癌群体的15%-20%。三阴乳腺癌临床特征不仅表现为侵袭性强、组织学分级较高、预后差、易发生内脏转移，且缺乏内分泌治疗及针对HER-2的分子靶向治疗的相应靶点，治疗手段的选择相对于其它分子亚型乳腺癌受到限制。

发明内容

为了解决上述问题，本发明的目的在于提供一种能在三阴性乳腺癌中高表达的环状RNA circEPSTI1。

本发明的目的之二是提供了如何通过检测组织中RNA circEPSTI1，对三阴性乳腺癌进行诊断的具体方法。

本发明的目的之三是提供了由RNA circEPSTI1制得的试剂盒，该试剂盒性价比高、易于推广应用。

本发明的目的之四是提供了所述RNA circEPSTI1可应用于三阴乳腺癌病人预后预测。

本发明是通过以下技术方案来实现的：

一种环状RNA circEPSTI1，所述circEPSTI1为小分子非编码环状，来源于EPSTI1基因的外显子区域，其序列如SEQ No∶1所示。

RNA circEPSTI1属于内源性非编码RNA的一种，其结构为共价环状闭合的单链RNA。具有结构稳定、丰度高和组织特异性表达等特征。其作为竞争性内源RNA(ceRNA)来发挥基因表达调控的作用。环状RNA利用其microRNA(miRNA)应答元件结合miRNA， 以阻断miRNA对其靶标表达的抑制作用，从而调控其他相关RNA的表达水平。本发明环状RNAcircEPSTI1与蛋白编码基因一样，具有主要的生物学功能，是肿瘤新的判定预后标志物和靶向治疗不错的工具，尤其是在三阴乳腺癌内高表达，为人类战胜三阴性乳腺癌提供新的策略。

所述RNA circEPSTI1的应用，将所述circEPSTI1用诊断三阴乳腺癌，具体方法如下：

（1）组织RNA的抽提

A取组织标本于研钵中加入液氮研磨，研磨成匀浆后加入Trizol和氯仿，震荡均匀后冰上放置；

B将步骤A中所得混合液低温离心，取上层水相加入预冷的异丙醇混匀，冰箱静置后低温离心；弃上清，加入75% DEPC水稀释的乙醇混匀，低温离心；弃上清，室温干燥后得到RNA；

C先往步骤B中所得RNA中加入DEPC水溶解，再用分光光度计测RNA的浓度及质量，OD260/280比值在1.6-1.8之间并进行EB胶电泳检测RNA质量，得到所述组织RNA，-70℃保存；

（2）特异性逆转录