[发明专利]一种基于索氏提取的紫草素提取和测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体是一种基于索氏提取的紫草素提取和测定方法。

背景技术

紫草，别名：硬紫草、软紫草。是中国药典收录的草药，药用来源为紫草科植物新疆紫草、紫草或内蒙紫草的干燥根。

紫草素是一类脂溶性很强的萘醌类色素，紫草苏用于急性黄疸型或无黄疸型肝炎、慢性肝炎、扁平疣等的治疗，有较好疗效，对肝硬变（腹水）、寻常疣也有效，同样也常用于化妆品行业中，具有抗皱、美标的功效。紫草传统的提取有效成分的方法有水蒸汽蒸馏法、减压蒸馏法、溶剂萃取法等，其工艺复杂、产品纯度不高。而通常用有机溶剂提取，提取物中常含有微量有机溶剂残留，并且回收溶剂等工艺过程会严重影响操作环境。

发明内容

本发明的目的在于提供一种基于索氏提取的紫草素提取和测定方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种基于索氏提取的紫草素提取和测定方法，包括以下步骤：

S1，固定水煮温度为100℃,并固定水量比为1:100，其中水量比（w/w）=样品量:水量，取4g粉碎了的紫草与400ml水置于500ml的圆底烧瓶中进行水煮；

S2，脱蛋白：

S21，先将溶液过滤除去紫草渣，然后加5%的活性炭脱色，煮沸3-5分钟，再过滤；

S22，将溶液蒸馏至一定体积，剩下的溶液与乙醇用1:5的体积混合，冷冻静置过夜可得絮状沉淀，然后再旋转离心，去掉上层清夜，固体放在红外灯烘干即可得产品；

S3，测定：

S31，取少量样品，用去离子水溶解；

S32，取粗产品溶液4ml与氯仿-正丁醇混合液1ml，混合充分振摇30min，离心1min，再将水相与氯仿相分开，以离子水为空白溶液作紫外测定；

S33，将干燥过的待测样品置于小试管里，依次加入100ulPMP溶液1-苯基-3-甲基-5-吡啶啉酮和100ulNaOH,混匀后混于70℃水浴中加热反应30min,取出室温放置10min；

S34，加入125ul、0.3mol/l的盐酸溶液, 中和，混匀后用2.5ml乙酸异戊脂萃取，涡旋3min，离心15min，小心弃去有机层，再萃取一次取下层；

S35，加水750ml混匀并离心15min，用HPLC分析。

作为本发明进一步的方案：步骤S1中，水煮时间至少为10h。

作为本发明进一步的方案：步骤S32中，氯仿-正丁醇混合液的混合比为4:1。

作为本发明进一步的方案：步骤S32中，取用至少4-5份样品，并重复过程4-5次，分别做紫外测定。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明基于索氏提取方法，结合水煮回流方式进行前处理，可有效将紫草渣去除，通过有机溶剂萃取结合低温高速离心，可有效降低有机物残留，同样简化了操作步骤；

以紫外测定获得标准液为同样步骤衍生化后的葡萄糖，蔗糖，麦芽糖的参数，将样品进行HPLC分析后与标准液进行对比测定，提高了测定精度。

具体实施方式

下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

本发明实施例中，一种基于索氏提取的紫草素提取和测定方法，包括以下步骤：

S1，固定水煮温度为100℃,并固定水量比为1:100，其中水量比（w/w）=样品量:水量，取4g粉碎了的紫草与400ml水置于500ml的圆底烧瓶中进行水煮；

S2，脱蛋白：

S21，先将溶液过滤除去紫草渣，然后加5%的活性炭脱色，煮沸3-5分钟，再过滤；

S22，将溶液蒸馏至一定体积，剩下的溶液与乙醇用1:5的体积混合，冷冻静置过夜可得絮状沉淀，然后再旋转离心，去掉上层清夜，固体放在红外灯烘干即可得产品；

S3，测定：

S31，取少量样品，用去离子水溶解；

S32，取粗产品溶液4ml与氯仿-正丁醇混合液1ml，混合充分振摇30min，离心1min，再将水相与氯仿相分开，以离子水为空白溶液作紫外测定；