[发明专利]一种观察家鸽肠道肌间神经丛的方法

权利要求书

1.一种观察家鸽肠道肌间神经丛的方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）按0.04～0.06mg/kg向家鸽注射肌松药，5～30 min后处死家鸽，取家鸽肠道，清理肠道内容物，制得待观察肠道；

所述家鸽体重300～340 g；清理肠道内容物为用含浓度为10^-4 mol/L尼莫地平的质量浓度0.75%的磷酸缓冲液冲洗；

（2）取步骤（1）制得的待观察肠道，结扎小肠的一端，用含有多聚甲醛质量百分比浓度为3.6～4.4%的磷酸缓冲液灌注后，结扎小肠的另一端，在4℃条件下，置于含有多聚甲醛质量百分比浓度为3.6～4.4%的磷酸缓冲液中固定6～8 h，转至含200～350g/L蔗糖的磷酸缓冲溶液中，4℃条件下脱水过夜，制得固定后样品；

所述磷酸缓冲液为含有多聚甲醛质量百分比浓度为4%的磷酸缓冲液；磷酸缓冲液为质量浓度0.75%的磷酸缓冲液；

（3）将步骤（2）制得的固定后样品截段后，剥离肌层，将肌层浆膜面向下平铺于载玻片上，然后剥离神经丛上的纵形肌，保留环形肌层，置于磷酸缓冲液中保存，制得待染样品；

所述步骤（3）中截段为剪成1 cm长的肠段；剥离肌层的步骤如下：

将肠段套在玻璃棒上，用大头针沿肠管纵轴划痕，眼科镊沿划痕处轻轻剥离肌层；

所述磷酸缓冲液为质量浓度0.75%的磷酸缓冲液；

（4）将步骤（3）制得的待染样品经质量浓度为0.04～0.06%的亚甲基蓝溶液漂染45～90s，蒸馏水冲洗，即得。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（1）中，肌松药的注射量为0.05mg/kg。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（2）中，小肠为按解剖位置分离的小肠。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（4）中，冲洗后还包括在解剖镜下用眼科镊剥离未去除的环形肌纤维的步骤。