[发明专利]荧光标记细胞核用试剂盒及其标记方法

说明书

本发明涉及一种荧光标记细胞核用试剂盒及其标记方法。具体而言，本发明提供了石墨烯量子点对细胞核进行荧光标记的方法，及上述量子点用于细胞核稳定荧光标记的试剂盒，通过本发明的方法和试剂盒可简单易行、高效稳定地对细胞核进行荧光标记，为细胞的长时间观察研究提供了细胞核稳定示踪的方法，所述方法和试剂盒可用于细胞和组织等的细胞核的高效荧光标记。

技术领域

本发明涉及石墨烯量子点生物荧光探针和细胞荧光标记技术领域，具体而言，本发明提供了一种新型石墨烯量子点对细胞核直接进行稳定荧光标记的方法，及含有上述量子点用于细胞核稳定荧光标记的试剂盒。

背景技术

在传统细胞核荧光标记技术中，大多使用有机荧光染料，如4',6-二脒基-2-苯基吲哚 (DAPI)和碘化内啶(PI)，进行细胞核标记。DAPI和PI都可以和细胞核内的染色体DNA强力结合，从而可以用于细胞核定位、观察结构和形态的改变。

目前，随着材料科学的迅速发展，石墨烯量子点 (GQDs) 因其独特的光学特性，逐步用于生物医学领域。与有机荧光染料相比，在激发光波长范围量子点具有更好的光稳定性，荧光强度高，激发光谱宽，发射光谱窄，不易被光漂白。这些特性决定了GQDs适用于生物检测与成像领域，可以作为优异的多元标记物。

目前，常用于细胞核荧光标记的荧光染料，例如：DAPI，PI等，都存在一个主要缺点，就是光稳定性很差，在激发光持续照射下，会迅速发生光漂白现象，导致很难长时间保持细胞核的荧光标记状态。因此，需要开发长期稳定荧光标记细胞核的示踪方法和产品。

另一方面，目前未有研究单纯利用量子点独特的化学优势直接实现对细胞核的选择性定位，此前的研究皆是将量子点与细胞核定位的导向分子，如抗体、细胞核定位信号等分子交联才能实现量子点对细胞核的定位标记，导致量子点对细胞核荧光标记步骤复杂，成本高且效率低下。而且国内外仅有联合使用GQDs和DAPI或PI等细胞核标记物，来联合对细胞核进行标记，而尚无研究直接利用GQDs独特的光学性能，不经任何特殊靶向分子介导的细胞核稳定长期示踪和标记。

发明内容

本发明的目的之一在于克服现有技术中存在的技术问题，提供一种荧光标记细胞核用试剂盒。

本发明的目的之二在于提供采用该试剂盒进行荧光标记的方法。

为达到上述目的，本发明采用如下技术方案：

为克服常规荧光染料DAPI或PI和无机染料量子点在细胞核染色上的上述缺陷，本发明进行多方面研究，合成一种独特的磺酸基石墨烯量子点结构，制备方法详见专利：(磺酸基石墨烯量子点生物荧光探针及其应用)（201510394852.8）。其对细胞核内特有组蛋白和DNA有高效且特异性结合，在荧光显微镜 (或共聚焦显微镜)下标记样本，用405 nm波长激发照射时细胞核呈现稳定的荧光，从而实现对生物样本的细胞核稳定的选择性示踪标记。

1、一种荧光标记细胞核用试剂盒，其特征在于该试剂盒是粒径范围2～3 nm的磺酸基石墨烯量子点溶液，其浓度为10-30 mg/L。

2、根据权利要求1所述的荧光标记细胞核用试剂盒，其特征在于所述的溶液的溶剂为去离子水、生理盐水或者用于细胞培养的培养基缓冲液。

3、一种荧光标记细胞核的方法，采用根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于该方法的具体步骤为：

1)用4%多聚甲醛固定生物样品；

2)使量子点与生物样品共孵育（量子点覆盖生物样品表面即可）；在室温下共孵育5 min，使用PBS缓冲体系洗去生物样品表面多余量子点（覆盖表面即可）。

3)对生物样品进行405 nm波长的激发光照射下观察细胞核。