[发明专利]羧基化聚乳酸羟基乙酸包裹PFOB纳米超声造影剂的制备方法

权利要求书

1.一种羧基化聚乳酸羟基乙酸包裹PFOB纳米超声造影剂的制备方法，其特征在于按照以下步骤进行：

（1） 合成PLGA-PEG-COOH：

称取PLGA-COOH 1.00g，加入重蒸氯仿5 mL，涡旋使PLGA-COOH溶解在氯仿中；

将32 mg NHS、50 mg EDC·HCl溶于1 mL重蒸氯仿中，涡旋后滴加到PLGA-COOH的氯仿溶液中，室温磁力搅拌反应12 h，得淡黄色澄清透明粘稠液，加入5 mL-20℃冰甲醇沉析，反复洗涤后45℃真空干燥2 h得活化酯PLGA-NHS；

称取1.00 g活化酯PLGA-NHS，加入3 mL重蒸氯仿，涡旋使活化酯PLGA-NHS溶解在氯仿中，然后加入250 mg NH₂-PEG-COOH 和72 mg 或92 μL的N,N-二异丙基乙胺，室温磁力搅拌反应24 h，加入预冷甲醇沉析，反复洗涤后45℃真空干燥24 h，即得PLGA-PEG-COOH；

（2） 制备纳米UCA：

配置分子量为13K~23K的1% PVA水溶液，称取PVA 1g，加入100 mL超纯水，静置溶胀过夜，在80℃水浴条件下磁力搅拌30 min，待PVA溶解且溶液为透明时冷却至室温，4℃下保存；

配置有机相：称取混合膜材PLGA-PEG-COOH 和 PLGA-COOH 100mg置于西林瓶中，先后加入4 mL CH₂Cl₂和60 μL PFOB，避光室温放置约30 min，待膜材料完全溶解且瓶底不见PFOB液滴后即得澄清透明有机相；

乳化：取20 mL1% PVA水溶液于50 mL玻璃离心管内，将上述有机相吹打后转移至管内，冰浴条件下8000 rpm高速剪切2 min，得到微米级牛奶样初乳，将初乳在冰浴条件下用超声细胞粉碎仪粉碎2 min，得到纳米级乳白色复乳；

有机溶剂挥发：将上述复乳转移至50 mL烧杯中，在30℃、800 rpm下磁力搅拌 3 h，挥去有机溶剂CH₂Cl₂，即得淡蓝色乳光的UCA溶液；

UCA的初步处理：将上述得到的UCA溶液低速离心除去少许沉淀及大粒子，上清过0.45 μm水系滤膜，得到滤液即为纳米超声造影剂，其中的纳米颗粒直径210.6±2.9 nm。

2.根据权利要求1所述的一种羧基化聚乳酸羟基乙酸包裹PFOB纳米超声造影剂的制备方法，其特征在于所述的PLGA-COOH分子量为18000，NH₂-PEG-COOH分子量为3400。

3.根据权利要求1所述的一种羧基化聚乳酸羟基乙酸包裹PFOB纳米超声造影剂的制备方法，其特征在于所述的超声细胞粉碎仪粉碎工作振幅30%，3 秒开/3 秒关。

4.根据权利要求1所述的一种羧基化聚乳酸羟基乙酸包裹PFOB纳米超声造影剂的制备方法，其特征在于所述的低速离心的离心条件是500 rpm离心10 min。