[发明专利]一种反式叶酸的制备方法及其应用

说明书

本发明涉及一种反式叶酸的制备方法及其应用，以对氨基苯甲酰谷氨酸、三氨基嘧啶硫酸盐、三氯丙酮为原料，经化学合成的方法，显著提高反式叶酸粗品的含量，再经制备色谱法分离，得到纯度大于95％的反式叶酸。本发明的研究有利于进一步研究反式叶酸的产生机理及控制方法，能有效提高叶酸质量控制水平。

技术领域

本发明属于有机合成领域，具体涉及一种反式叶酸的制备方法及其在叶酸质量控制中的应用。

背景技术

反式叶酸(isofolic acid)：

英文名：N-4-[(2-amido-4-oxo-1,4-dihydro-7-terene)methylamino]benzoyl-L-glutamic acid。

中文名：N-(4-((2-氨基-4-羟基-7-蝶啶基)甲基)氨基)苯甲酰-L-谷氨酸。

反式叶酸，即为EP药典中叶酸杂质C。

叶酸(folic acid)也叫维生素B9，是一种水溶性维生素，是米切尔(H.K.Mitchell，1941)从菠菜叶中提取纯化的，故而命名为叶酸。有促进骨髓中幼细胞成熟的作用，人类如缺乏叶酸可引起巨红细胞性贫血以及白细胞减少症，对孕妇尤其重要。

叶酸的摄入不足可引起多种相应的缺乏症，如新生儿畸形、巨红细胞贫血、心血管疾病、老年痴呆症、寄生虫病、坏血症和类风湿性关节炎等。叶酸和叶酸的相关制品已经广泛应用于食品、药品、饲料、科研和化工业。

叶酸成品在进入欧盟市场的时候，应符合欧洲药典EP的质量要求，即叶酸成品中杂质反式叶酸的含量≤0.5％。在叶酸质量研究中，需得到纯度大于95％的反式叶酸对照品，用于叶酸成品中杂质定性及定量研究。目前反式叶酸的制备方法尚未见报道，而反式叶酸的标准品也无法购到。

现有技术中对叶酸杂质的研究仅限于采用控制蝶酸含量等纯化的方法，如CN102432610B以及CN104098569A等中国专利文献的记载。但是这些方法都仅仅是从怎么去除蝶酸杂质的角度，并没有深入研究叶酸成品中其它杂质如反式叶酸的产生机理及控制方法。

发明内容

针对现有技术中存在的不足，本发明提供一种反式叶酸的制备方法及其应用，以N-(4-对氨基苯甲酰)-L-谷氨酸(本发明中也称为对氨基苯甲酰谷氨酸)、2,4,5-三氨基-6-羟基嘧啶硫酸盐(本发明中也称为三氨基嘧啶硫酸盐)、1,1,3-三氯丙酮(本发明中也称为三氯丙酮)为原料，经化学合成的方法，显著提升杂质的含量，再经制备色谱法分离，得到纯度大于95％的反式叶酸。本发明的研究有利于进一步研究反式叶酸的产生机理及控制方法，有效提高叶酸质量控制水平。

反式叶酸反应方程式如下：

在本发明的优选的实施方式中，所述的制备方法包括以下步骤：

(1)反式叶酸粗品的合成

将对氨基苯甲酰谷氨酸、三氨基嘧啶硫酸盐、三氯丙酮溶于水中，其中基于质量比计，对氨基苯甲酰谷氨酸：三氨基嘧啶硫酸盐：三氯丙酮：水＝1：1～1.5：1.5～3：100～150，控制反应pH为2～7，反应温度30～80℃，保温2～10小时，过滤，滤饼用氨水溶解，过滤，滤液调节pH为1～3，过滤，得到粗品，纯度5～15％；

(2)反式叶酸的提纯

粗品用氨水溶解，过滤，滤液进半制备色谱分离，每次10ml，收集流出液，合并后减压浓缩，加纯化水稀释1～5倍，泵入半制备色谱，用质量分数为5～20％甲醇洗出，收集流出液，减压浓缩，浓缩液调pH至1～5，离心沉降，去除上层液，沉淀物经干燥，得到反式叶酸，其纯度95～97％。