[发明专利]一种细胞培养基及生产蛋白质的方法

说明书

技术领域

本发明属于生物制药领域，涉及一种通过细胞培养生产蛋白质的方法。

背景技术

西妥昔单抗(cetuximab，商品名为爱必妥)是由ImClone Systems公司开发的一种抗EGFR人鼠嵌合型单克隆抗体，用于治疗EGFR高表达的转移性结直肠癌及头颈部癌症。表达西妥昔单抗的宿主细胞为鼠源骨髓瘤细胞SP2/0。SP2/0细胞表达的蛋白除了非人源NGNA(N-glycolylneuraminic acid，N-羟乙酰基神经氨酸)修饰外，还有少量的鼠源α-(1,3)半乳糖残基，其能触发机体严重的免疫反应。西妥昔单抗就因含鼠源“α-(1,3)半乳糖残基”结构而造成临床上出现过敏性休克等严重不良事件，该不良反应一定程度上限制了其使用。

目前，70％以上的抗体蛋白都是由CHO细胞生产的。对比其他哺乳动物细胞，CHO细胞的优点主要包括：①CHO细胞表达的蛋白糖基化修饰结构与人类基本一致，CHO细胞缺乏有活力的α-(1,3)半乳糖残基转移酶，因此其表达的重组蛋白末端不会有α-(1,3)半乳糖残基修饰；②CHO细胞能够在生物反应器培养的过程中获得较高的细胞密度；③CHO细胞相比其他生产用哺乳动物细胞基因组更容易进行改造和扩增；④易适应于无血清悬浮培养条件，工艺易放大。

CN 102994442A公开了一种悬浮培养CHO细胞生产重组抗EGFR人鼠嵌合单克隆抗体的方法，其中培养CHO细胞的培养基含水解物成分，水解物具有促进细胞生长与重组蛋白表达的功能。但是水解物成分复杂，批间一致性难以控制，因此对产品质量的批间稳定性具有潜在风险。

发明内容

本发明的目的是提供一种培养CHO细胞以生产蛋白质的方法，在化学成分限定的培养基基础上，对细胞培养基进行氨基酸优化，从而提高细胞的蛋白表达能力，解决现有技术中存在的蛋白生产的问题。

在第一个方面，本发明提供一种细胞培养基，包括基础培养基和补料培养基，其中，所述补料培养基包括40-80g/L的CD EfficientFeed C AGT、20-70g/L的Cell Boost 5、0.1-0.8g/L的谷氨酸、0.5-1.2g/L的酪氨酸、0.2-1.0g/L的半胱氨酸、0-0.8g/L的色氨酸、0.1-0.3g/L的苏氨酸、0-0.4g/L的苯丙氨酸和1-2g/L的PF68。

其中，上述基础培养基可以是任何用于细胞生长阶段的培养基。优选的为哺乳动物细胞培养用基础培养基，更优选的为CHO细胞培养用基础培养基。

优选地，所述补料培养基包括56-80g/L的CD EfficientFeed C AGT、更优选56g/L的CD EfficientFeed C AGT，20-70g/L的Cell Boost 5、更优选21g/L的Cell Boost 5，0.19-0.58g/L的谷氨酸、更优选0.58g/L的谷氨酸，0.5-1.02g/L的酪氨酸、更优选1.02g/L的酪氨酸，0.43-0.85g/L的半胱氨酸、更优选0.85g/L的半胱氨酸，0-0.8g/L的色氨酸、更优选0.4g/L的色氨酸，0.12-0.3g/L的苏氨酸、更优选0.12g/L的苏氨酸，0-0.35g/L的苯丙氨酸、更优选0.17g/L的苯丙氨酸，和1-2g/L的PF68、更优选1.5g/L的PF68。

进一步优选地，所述补料培养基包括56g/L的CD EfficientFeed C AGT、21g/L的Cell Boost 5、0.58g/L的谷氨酸、1.02g/L的酪氨酸、0.85g/L的半胱氨酸、0.4g/L的色氨酸、0.12g/L的苏氨酸、0.17g/L的苯丙氨酸和1.5g/L的PF68。

进一步优选地，所述补料培养基还包括pH调节剂，所述补料培养基的pH值为6.9-7.2。

优选地，所述基础培养基包括5-20g/L的CD FortiCHO AGT，进一步优选为12.5g/L的CD FortiCHO AGT，和5-15g/L的Ex-Cell 302，进一步优选为10.8g/L的Ex-Cell 302。进一步优选地，所述基础培养基还包括pH调节剂，所述基础培养基的pH值为6.9-7.2。

优选地，所述基础培养基包括5-20g/L的Dynamis AGT，进一步优选为12.5g/L的Dynamis AGT，和5-15g/L的Ex-Cell 302，进一步优选为10.8g/L的Ex-Cell 302。进一步优选地，所述基础培养基还包括pH调节剂，所述基础培养基的pH值为6.9-7.2。