[发明专利]一种细胞培养基及生产蛋白质的方法

权利要求书

1.一种细胞培养基，包括基础培养基和补料培养基，其中，

所述补料培养基包括40-80g/L的CD EfficientFeed C AGT、20-70g/L的Cell Boost 5、0.1-0.8g/L的谷氨酸、0.5-1.2g/L的酪氨酸、0.2-1g/L的半胱氨酸、0-0.8g/L的色氨酸、0.1-0.3g/L的苏氨酸、0-0.4g/L的苯丙氨酸和1-2g/L的PF68；优选地，所述补料培养基还包括pH调节剂，所述补料培养基的pH值为6.9-7.2。

2.根据权利要求1所述的细胞培养基，其中，所述基础培养基为哺乳动物细胞培养用基础培养基，优选所述哺乳动物细胞为CHO细胞。

3.根据权利要求1或2所述的细胞培养基，其中，所述基础培养基包括5-20g/L的CD FortiCHO AGT或Dynamis AGT，和5-15g/L的Ex-Cell 302；优选地，所述基础培养基还包括pH调节剂，所述基础培养基的pH值为6.9-7.2。

4.根据权利要求1-3任一所述的细胞培养基，其中，所述补料培养基包括56-80g/L的CD EfficientFeed C AGT、20-70g/L的Cell Boost 5、0.19-0.58g/L的谷氨酸、0.5-1.02g/L的酪氨酸、0.43-0.85g/L的半胱氨酸、0-0.8g/L的色氨酸、0.12-0.3g/L的苏氨酸、0-0.35g/L的苯丙氨酸和1-2g/L的PF68。

5.根据权利要求3所述的细胞培养基，其中，

所述基础培养基包括12.5g/L的CD FortiCHO AGT或Dynamis AGT，和10.8g/L的Ex-Cell 302；

所述补料培养基包括56g/L的CD EfficientFeed C AGT、21g/L的Cell Boost 5、0.58g/L的谷氨酸、1.02g/L的酪氨酸、0.85g/L的半胱氨酸、0.4g/L的色氨酸、0.12g/L的苏氨酸、0.17g/L的苯丙氨酸和1.5g/L的PF68。

6.根据权利要求1-5任一所述的细胞培养基培养动物细胞的方法，其中所述动物细胞为哺乳动物细胞，优选地，所述哺乳动物细胞为CHO细胞。

7.一种培养细胞生产蛋白质的方法，包括用根据权利要求1-5中任一项所述的细胞培养基培养细胞，其中，所述基础培养基用于细胞生长阶段，所述补料培养基用于细胞生产蛋白质阶段；

优选地，细胞培养过程中，细胞密度达到5-8×10⁶细胞/ml时，细胞培养进入细胞生产蛋白质阶段。

8.根据权利要求7所述的方法，包括步骤：

(1)用如权利要求1-5中任一项所述的细胞培养基中的基础培养基悬浮培养细胞，起始接种密度为0.5-1×10⁶细胞/ml，培养温度为35℃以上，优选为36-37℃；

(2)当细胞密度生长到5-8×10⁶细胞/ml时，降低培养温度至31-35℃，优选至33℃，流加如权利要求1-5中任一项所述的细胞培养基中的补料培养基，每天加入量为培养物体积的2-5％；

(3)当细胞活率在60-80％时，停止流加补料培养基，结束培养。

9.根据权利要求8所述的方法，其中，所述步骤(1)的悬浮培养细胞采用一次性搅拌式生物反应器悬浮培养；优选地，所述一次性搅拌式生物反应器主要由控制塔、罐体和一次性塑料培养袋组成，规模为50-500L，优选为200L。

10.根据权利要求8-9任一所述的方法，其中，步骤(1)中，控制葡萄糖浓度为1-3g/L；和/或步骤(2)中，控制葡萄糖浓度为3-6g/L。

11.根据权利要求8-10任一所述的方法，其中，步骤(1)中，转速为60-200rpm，pH维持在6.8-7.2；和/或步骤(2)中，转速为60-200rpm，pH维持在6.8-7.2。

12.根据权利要求7-10任一所述的方法，其中，所述蛋白质为重组抗EGFR人鼠嵌合单克隆抗体；所述细胞为表达重组抗EGFR人鼠嵌合单克隆抗体的CHO细胞；优选的所述单克隆抗体为西妥昔单抗。