[发明专利]无刺蜂蜂蜜多酚物质的提取及其在免疫调节中的应用

说明书

本发明提出一种无刺蜂蜂蜜多酚物质的提取方法，包括步骤：1)无刺蜂蜂蜜用醋酸水溶液溶解，经过搅拌和超声处理后，过滤，分离出无刺蜂蜂蜜水溶液；2)将大孔树脂倒入无刺蜂蜂蜜水溶液中，搅拌吸附0.5～2h；3)将吸附后的大孔树脂填入柱中，分别用醋酸水溶液、纯水淋洗，最后用乙醇溶液洗脱，4)洗脱液减压真空浓缩至成为固形物，复溶于纯水，并用乙酸乙酯萃取。本发明通过XAD‑2柱层析提取富集无刺蜂蜂蜜有效成分，进行了无刺蜂蜂蜜提取物的成分分析、应用研究，发现无刺蜂蜂蜜提取物具有丰富的黄酮、多酚类活性成分，具有显著的抗氧化、抗炎活性，对于预防和治疗炎症疾病药物、食品、保健品的开发和应用具有广泛的应用价值。

技术领域

本发明属于生物化学领域，具体涉及一种蜂蜜的提取方法和提取产物。

背景技术

无刺蜂(Stingless bees)是一类营群体生活并能酿蜜的昆虫，隶属于膜翅目(Hymenoptera)、蜜蜂总科(Apoidea)、蜜蜂科(Apidae)，蜜蜂亚科(Apinae)，麦蜂族(MeliPonini)，无刺蜂属(Trigona Jurine)，体呈黑色，体小灵活，是热带地区植物的主要传粉蜂种，主要分布于热带和亚热带地区，我国仅在云南、海南和台湾地区的田间森林有分布。无刺蜂蜂蜜是无刺蜂从植物蜜腺或其他部位采来的花蜜，经充分酿造，存储于巢房的甜蜜物质，与西方蜜蜂蜂蜜相比，具有水分含量高、酸度高、酶值低、粘度低等特点。蜂蜜早已被人们作为一种天然的甜味剂，由于其存在的活性成分，也被广泛应用于临床实践。已有报道证明蜂蜜具有多种生物活性，而对无刺蜂蜂蜜的活性成分的提取和分离研究进行的还比较少。

无刺蜂蜂蜜含有丰富的营养物质和生物活性成分，世界范围内，主要产自秘鲁、瓜地马拉、墨西哥、委内瑞拉等国家。Melipona spp，Scaptotrigona spp，Trigona spp等无刺蜂属蜂蜜已广泛应用于传统医学，具有显著的抗氧化、抗菌、抗突变、促进伤口愈合等生物活性功能。无刺蜂蜂蜜的化学成分复杂，尤其是其主要活性成分酚酸黄酮类物质，因蜂种、采集植物、地理环境、气候、季节的变化而导致无刺蜂蜂蜜成分、活性的差异。

我国已发现的无刺蜂蜂种有黄纹无刺蜂(Trigona ventralis Smith)、顶无刺蜂(T.terminate Smith)、暗翅无刺蜂(T.vidua Lepeletier)、蜜色无刺蜂(T.luteaBingham)、黑胸无刺蜂(T.pagdeni Sehwarz)、棕足无刺蜂(T.smithii Smith)、棕胸无刺蜂(T.thoracica Smith)、黑腿无刺蜂(T.vidua Smith)、黑腹无刺蜂(T.canifrons Smith)、黄跗无刺蜂(T.iridipennis Smith)，其中以黄纹无刺蜂分布最广、数量最多。但无有关我国无刺蜂蜂蜜成分和活性的研究报道。

发明内容

针对本领域的不足之处，本发明的目的是提供一种无刺蜂蜂蜜的提取方法。

本发明的另一目的是提出所述提取方法获得的提取物。

本发明的第三个目的是提出所述提取物的应用。

实现本发明上述目的的技术方案为：

一种无刺蜂蜂蜜多酚物质的提取方法，包括步骤：

1)无刺蜂蜂蜜用醋酸水溶液溶解，经过搅拌和超声处理后，过滤，分离出无刺蜂蜂蜜水溶液；

2)将大孔树脂倒入无刺蜂蜂蜜水溶液中，搅拌吸附0.5～2h；

3)将吸附后的大孔树脂填入柱中，分别用醋酸水溶液、纯水淋洗(以除去极性物质，糖等)，最后用乙醇溶液洗脱并收集洗脱液，

4)洗脱液减压真空浓缩至成为固形物，复溶于纯水，并用乙酸乙酯萃取。收集乙酸乙酯层，氮气吹干，得无刺蜂蜂蜜提取物。该提取物放置于-20℃冰箱中备用。

本提取方法可针对黄纹无刺蜂的蜂蜜但不限于此。