[发明专利]一种纳豆多肽的制备方法及其在制备降血脂药物中的应用

说明书

本发明公开了一种纳豆多肽的制备方法，包括大豆皮清洗除杂、浸泡，沥干、配料、灭菌、接种、固态发酵、加水打浆、二次液态发酵、活性炭吸附、超滤纯化、调pH、纳滤浓缩和喷雾干燥等工序。本发明在未使用外源性蛋白酶的条件下，通过固态和液态二步发酵，通过分步控制发酵条件调节菌体发酵代谢流，积累了高活性的纳豆多肽，并通过多步纯化工艺制备了高纯度的纳豆多肽产品。药效试验结果表明，本发明制备的纳豆多肽具有较好的降低血脂的功效，而且无任何毒副作用，可广泛应用于药物和保健食品中。

技术领域

本发明涉及纳豆多肽的制备方法及其在制备降血脂药物中的应用。

背景技术

纳豆是日本的一种传统食品，在日本有1000年以上的食用历史，将大豆煮熟后接入纳豆菌(Bacillus subtilis natto)发酵后即可得到。纳豆含有众多生理活性物质，如纳豆激酶、纳豆多肽、γ-聚谷氨酸、纳豆芽孢杆菌等。这些成分有众多的生理活性，如溶血栓、降血压、改善动脉粥样硬化、降血脂、抗癌、调节肠胃、补钙等。

自1980发现纳豆中的纳豆激酶具有溶栓作用以来，世界范围内的科研人员对纳豆进行了全方位的研究。研究发现，常吃纳豆的人群血脂能得到有效控制，但台湾的Nae-Cherng Yang博士对纳豆激酶进行的人体实验却发现，服用纳豆激酶6个月对血脂没有影响，说明纳豆中降血脂的成分并不是纳豆激酶，而是其它成分。

纳豆多肽是纳豆芽孢杆菌在发酵过程中代谢产生的一类多肽物质，与其它传统采用酶制剂制备的食源性多肽相比，最大的区别就是纳豆多肽是纳豆芽孢杆菌发酵分泌的肽类物质，纳豆中具有降血脂作用的活性物质可能就是纳豆多肽。

传统工艺生产的纳豆中就含有纳豆多肽，其含量在5-6％。CN1545910A公开了一种纳豆多肽含量和纳豆激酶活性均比较高的纳豆多肽营养粉，采用木瓜蛋白酶和菠萝蛋白酶对纳豆进行多肽化，制备的纳豆多肽营养粉中纳豆多肽含量＞15％，其含量总体偏低。所以目前纳豆多肽的制备技术还处于起步阶段，特别是在生产过程中不添加外源性的酶制剂，仅依靠纳豆芽孢杆菌发酵代谢产生的高含量、高活性的纳豆多肽生产技术，在国内外都没有取得突破性的进展。

发明内容

本发明的目的是提供一种纳豆多肽的制备方法，该方法结合了固态发酵、液态发酵、脱色脱味、膜分离等先进工艺，制备的纳豆多肽不仅纯度高、分子量大小均匀，而且还具有较好的降血脂作用。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

一种纳豆多肽的制备方法，包括以下步骤：

(1)将大豆皮清洗除杂，加水浸泡3-8h，沥干后按大豆皮重量的2-10％加入大豆蛋白粉，搅拌均匀后热压灭菌，冷却后再按大豆皮重量的0.2-1％接种纳豆芽孢杆菌种子液，在温度35-40℃、湿度60-90％的条件下固态发酵20-50h；

(2)向固态发酵后的物料中按大豆皮重量的5-20倍加水进行打浆，随后将打浆液转入液态发酵罐中，按大豆皮重量加入0.5-2％的蔗糖、0.6-6％的氨基酸，控制温度35-40℃、转速100-300r/min、通气量1-2.5VVM，液态发酵3-6h后再向发酵罐中一次性补加占大豆皮重量0.1-1％的氯化钙，保持发酵条件不变，继续发酵5-10h；

(3)将发酵液的pH调至3-5，加入占发酵液重量0.2-1％的活性炭，40-60℃搅拌0.5-2h后进行离心，取上清液进行超滤，滤液调pH至6-8，再进行纳滤，将滤液喷雾干燥，即得成品。

作为优选方案，所述热压灭菌的温度为115-121℃。

作为优选方案，所述纳豆芽孢杆菌种子液的有效活菌数为10⁷-10⁹cfu/ml。

作为优选方案，所述氨基酸为脯氨酸和酪氨酸，二者为任意比例。