[发明专利]一种利用高效液相色谱从可可粉中制备表儿茶素的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种制备方法，具体涉及一种利用高效液相色谱从可可粉中制备表儿茶素的方法。

背景技术

可可粉为梧桐科可可属植物可可树的种子可可(Theobroma cacao Linn.)经加工而成的粉末。可可树原产于南美洲亚马逊河上游的热带雨林地区，现主要分布在印度尼西亚、加纳、东南亚、西非等赤道南北纬10°以内的狭窄地带，我国海南有引进栽种。可可粉具有抗氧化、调节免疫、调节血糖水平、降低血浆胆固醇、抗龋齿、助消化等多种生理功效，现已广泛应用于巧克力、糕点、冰激凌、饮料等食品行业。现代研究表明，可可粉中所含有的表儿茶素是其多酚类生理活性物质的主要有效成分之一，能有效地抑制包括糖尿病、心脏病、中风、癌症等在内的多种疾病，具有调节血小板、保护心血管系统、改善视力、降血压、抗氧化等多种生理功效。

但目前我国可可制品所执行的行业标准仅对可可粉感官指标、理化指标及微生物指标进行了相关规定，未能反映可可粉的内在质量，不能对其质量进行有效控制。

指纹图谱作为一种综合鉴定手段，以样品中化学成分系统研究为基础，能全面的反映样品中所含化学成分的种类和含量，可用于与样品的真实性、特征性和优良性等进行评价，是样品质量控制的主要方法之一，现已成为国际公认的质量控制最有效技术之一。目前，指纹图谱作为可可粉的质量控制手段仅对其多糖和脂类成分进行了研究，尚无基于可可粉中主要活性成分指纹图谱的相关研究。

发明内容

本发明提供一种利用高效液相色谱从可可粉中制备表儿茶素的方法，该法操作简便，得到的表儿茶素纯度高，应用效果好。

为实现上述目的，本发明所提供的一种利用高效液相色谱制备表儿茶素的方法，它包括以下步骤：

（1）将可可粉碎至40～80目，制备成可可粉，备用；

（2）准确称取一定量的可可粉，加入8～20倍重量的30%～70%甲醇水溶液，超声提取30～60min；

（3）取上清液经微孔滤膜过滤，滤液作为供试液；

（4）精密称取表儿茶素对照品，加入与步骤（2）相同浓度的甲醇水溶液进行超声溶解，制成表儿茶素对照品溶液；

（5）色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填料，流动相A为乙腈，流动相B为质量百分数为0.02%～0.1%的磷酸缓冲盐溶液；采用梯度洗脱方式，其洗脱程序为：

0 min→20min，流动相A为10%→15%、流动相B为90%→85%；

20 min→30min，流动相A为15%→30%、流动相B为85%→70%；

检测波长200～215nm，流速为0.5-1.0mL/min，柱温25～40℃；

（6）液相色谱谱图的获得：精密吸取对照品溶液和供试品溶液10μL，按照设定的色谱条件，注入高效液相色谱仪，通过对照品表儿茶素的色谱峰，确定供试品溶液色谱图中的表儿茶素峰；

（7）做线性关系的考察试验，包括精密度试验、稳定性试验、重复性试验；

（8）在20.0～23.0min期间收集流动相，然后减压浓缩制得浸膏，然后冷冻干燥成粉状，即得高纯度表儿茶素。

作为优选，步骤（3）中所述微孔滤膜为0.45μm微孔滤膜。

作为优选，步骤（2）具体为，准确称取一定量的可可粉，加入10～15倍重量的50%～60%甲醇水溶液，超声提取40～50min。

作为优选，步骤（8）具体为，在20.0-23.0min期间收集流动相，然后在-0.085～-0.099MPa、25～40℃条件下减压浓缩制得浸膏，最后在-0.095～-0.099MPa、-50～-30℃条件下冷冻干燥成粉状，即得高纯度表儿茶素。

本发明采用高效液相色谱法对可可粉活性成分的指纹图谱进行了研究，将所得的供试品溶液的指纹图谱与可可粉标准指纹图谱经中药色谱指纹图谱相似度评价系统试验。

本发明具有以下优点：

1、本发明建立的色谱方法具有精密度高、稳定性好、重复性好的优点，符合指纹图谱的要求，可作为可可粉质量检测方法，全面监控可可粉的质量；

2、本发明能将可可粉活性成分进行有效分离，构建了可可粉的指纹图谱，填补了可可粉在活性成分分离和指纹图谱中研究的空白；

3、对可可粉的质量评价不再局限于对某一种成分的研究，而是从整体评价，应用指纹图谱特征对可可粉的质量进行全面控制，确保可可粉的保健功效及可可制品的质量与安全，提供了一种有效的产品质量检测方法和工艺技术创新的评价平台。

附图说明

图1 为对照品表儿茶素的色谱图；