[发明专利]一种检测生物巯基化合物的体系及其检测方法

说明书

一种检测生物巯基化合物的体系及其检测方法。本发明的目的是提供一种简单的、选择性好的、灵敏度高的检测生物巯基化合物的方法。此比色检测的主要机理是I^‑可以催化H₂O₂氧化3,3',5,5'‑四甲基联苯胺(简称TMB)生成蓝色的氧化态TMB，随着生物巯基化合物的加入，抑制了氧化态TMB的生成，同时溶液的颜色变浅，且在652nm处的紫外‑可见吸收峰的强度大大降低，从而实现对生物巯基化合物的灵敏检测。该方法不受其它氨基酸和氧化型谷胱甘肽的影响，有很好的选择性，并成功的应用于实际样本的检测中。

技术领域

本发明涉及一种检测生物巯基化合物的I^--H₂O₂-TMB体系及其检测方法，具体的说是通过I^--H₂O₂-TMB体系、利用生物巯基化合物抑制I^-氧化3,3',5,5'-四甲基联苯胺(简称TMB)的过程，使溶液颜色变浅、紫外-可见吸收峰强度降低，从而实现对生物巯基化合物进行检测。

技术背景

生物巯基化合物主要包括半胱氨酸、谷胱甘肽以及同型半胱氨酸，这些生物巯基化合物在人体中的含量与许多疾病相关，在病理诊断中具有重要的作用。例如，半胱氨酸是重要的具有巯基官能团的天然氨基酸之一，它的缺失可能导致水肿、肝损伤、心脏等问题；人体血浆中同型半胱氨酸过多可能引起骨质疏松、癌症、阿尔茨海默病等疾病；谷胱甘肽是细胞内丰富的硫醇化合物，其含量不正常可能会引起白细胞丢失、哮喘、神经退行性病变等疾病。因此发展简单、可靠、选择性好、灵敏度高的生物巯基化合物的检测方法对人类健康具有重要的现实意义。

目前，存在许多生物巯基化合物的检测方法，包括电化学方法、荧光光谱法、高效液相色谱法、毛细管电泳法、紫外-可见吸收光谱法及化学发光法。尽管这些方法可以提供好的选择性和较高的灵敏度，但是它们需要精密的仪器、复杂的技术、费时的前处理而且不适用于现场检测。随着生活水平的提高，人们对自身的健康愈加重视。因此，发展简单、快速、灵敏、低成本的生物分析检测方法迫在眉睫。

发明内容

本发明的目的是提供一种检测生物巯基化合物的I^--H₂O₂-TMB体系及其检测方法，利用该I^--H₂O₂-TMB体系可以简单、快速的对生物巯基化合物进行检测，I^-可以催化H₂O₂氧化TMB生成蓝色的氧化态TMB(简称ox-TMB)，并且在652nm处有较强的紫外-可见吸收峰。随着检测体系中生物巯基化合物浓度的增加，ox-TMB的生成被抑制，导致溶液的颜色逐渐褪去，且在652nm处的紫外-可见吸收峰强度降低。通过检测体系中生物巯基化合物加入前后溶液颜色的变化可以完成定性分析，而通过紫外-可见吸收峰强度的变化可以进行定量检测。

本发明的目的是这样实现的，一种检测生物巯基化合物的I^--H₂O₂-TMB体系，该体系是通过依次向1.5mL离心管中加入醋酸缓冲溶液、KI水溶液、H₂O₂水溶液、TMB乙醇溶液混合均匀制得；

具体步骤如下：

①、将KI溶于超纯水中，配制成浓度为10mmol·L^-1的A溶液；将H₂O₂溶于超纯水中，配制成浓度为5mol·L^-1的B溶液；将TMB溶于乙醇中，配制成浓度为1mmol·L^-1的C溶液；