[发明专利]一种无佐剂单剂量HBsAg纳米凝胶疫苗及其制备方法

说明书

本发明公开了一种无佐剂单剂量HBsAg纳米凝胶疫苗及其制备方法，该无佐剂单剂量HBsAg纳米凝胶疫苗的制备步骤如下：在恒温搅拌条件下，逐步混合CS、HBsAg、γ‑PGA溶液，即可制备正电荷或者负电荷的无佐剂单剂量HBsAg纳米凝胶疫苗。正电荷HBsAg纳米凝胶疫苗只需要单剂量注射即可获得有效的抗体表达，增强细胞免疫，能够更好提高接种者顺从性，保证HBV预防的普遍实施。该疫苗能够诱导免疫记忆的形成，对接种者进行长久免疫保护。负电荷HBsAg纳米凝胶疫苗单剂量注射虽然没有明显的抗体产生，但是与正电荷HBsAg纳米凝胶疫苗联合应用，能够获得更强的细胞免疫，能够具有更好的对HBV的长效免疫保护。

技术领域

本发明涉及生物医药领域，特别是涉及一种新型的无佐剂单剂量HBsAg纳米凝胶疫苗及其制备方法。

背景技术

据最近的统计，全世界大约有20亿人曾经感染过乙肝病毒(HBV)。其中，超过3.5亿转变为慢性乙肝病毒(CHB)携带者，他们将会有转化为肝硬化和肝癌的风险。每年因HBV感染造成患者死亡约200万人左右。中国是慢性HBV感染的重灾区，HBV携带者的比例高达9.3％。因此，HBV引起的持续性病毒感染仍严重危害我国人民健康，影响我国人口素质的提高。

预防性免疫是当前控制HBV感染最好的方法。自1982年起，安全有效的HBV预防性疫苗已上市销售。这种疫苗是从慢性乙肝患者的血浆中收集乙肝表面抗原(HBsAg)制作，存在一定的安全性问题，而且由于来源困难，难以满足普遍接种的需要。之后，重组DNA技术的发展使大量生产HBsAg疫苗变为现实。该类疫苗是采用基因工程的重组技术，首先把HBsAg的基因片段插入酵母细胞或哺乳动物细胞基因中，在体外培养增殖过程中组装或分泌HBsAg，将其收集、提纯，辅以磷酸铝或氢氧化铝为佐剂制成的乙肝疫苗。现在重组疫苗己在大部分国家广泛应用。1999年之后，美国批准HBV疫苗可以在婴儿和儿童使用。我国卫生部近10多年来不断加大HBV防控工作力度，采取预防为主的综合防控措施，取得了显著成就，目前接种率均在90％以上。在新生儿计划免疫实施20多年后，我国儿童乙肝发病率、HBV携带率有了明显的下降。

但是，铝佐剂乙肝疫苗在应用中，越来越多不完善的地方暴露出来。目前，国内外大多使用乙肝免疫流程为WHO推荐使用的0、1、6月进行三次免疫接种，需要耗时六个月。这无论从经济上还是使用便利上都限制了现行HBV疫苗在发展中国家的广泛应用。有研究显示，该方法的免疫接种完成率仅为50％左右，部分接种者无法按该流程进行全程接种，从而导致无(弱)免疫应答，成为乙肝易感人群。而且，尽管铝化合物作为佐剂通常认为是比较安全的，但是越来越多的潜在副作用被报道。例如，无菌性脓肿、嗜酸性粒细胞增多、肌筋膜炎、肉芽肿形成和阿尔茨海默氏病等。尽管，现有乙肝疫苗可使大约95％的接种人群产生乙肝抗体，但由于铝佐剂疫苗只能诱导体液免疫，不能激发细胞免疫而降低了乙肝疫苗的免疫效果，仍有少部分人对乙肝疫苗无应答或低应答，不能产生足够抗体预防HBV感染。更重要的是，继新生儿乙肝疫苗计划免疫策略实施20多年来，小年龄组人群乙肝的发病率得到有效的控制，但是成人作为乙肝发病的高危人群并没有改变。有研究报道，20-49岁的乙肝报告发病率超过100/10万。成人乙肝发病率较高的原因是，尽管新生儿期接种过乙肝疫苗，但随着时间的推移，乙肝获得性免疫减弱，重新成为乙肝易感的高危人群。

综上，目前制约现有乙肝疫苗应用的主要原因包括：一是铝佐剂疫苗免疫接种次数多，耗费时间长，限制疫苗接种全面开展；二是铝佐剂疫苗的免疫记忆时间短，随着时间推移，乙肝获得性免疫会减弱；三是铝佐剂疫苗只能诱导体液免疫，少部分人不能产生足够抗体预防HBV感染；四是铝化合物作为佐剂可能导致多种不良反应，影响接种人群用药安全。因此，开发新型的乙肝疫苗对于乙型肝炎的防治具有十分重要的意义。

发明内容

针对上述现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种新型的无佐剂单剂量HBsAg纳米凝胶疫苗及其制备方法。本发明的疫苗单次免疫即可获得良好的免疫效果，而且免疫记忆时间长，延长了疫苗的作用时间。