[发明专利]塞尼卡谷病毒结构蛋白抗体酶联免疫检测试剂盒

说明书

本发明公开了一种塞尼卡谷病毒结构蛋白抗体酶联免疫检测试剂盒。该试剂盒包括酶标板、阳性对照血清、阴性对照血清、酶标二抗、样品稀释液、20倍浓缩洗涤液、底物液A、底物液B、终止液，其中所述酶标板包被有塞尼卡谷病毒结构蛋白抗原表位多肽组合物。该抗原表位多肽组合物为序列表中序列1所示的多肽、序列表中序列2、序列表中序列3所示的多肽或序列表中序列4所示的多肽中的一种或两种以上的任意组合。本试剂盒使用化学合成抗原肽包被酶标板，抗原用量少、灵敏性和特异性高，可以高效地检测是否存在感染塞尼卡谷病毒的结构蛋白抗体。本发明试剂盒敏感性高、特异性好、且操作便捷，具有良好的市场前景。

技术领域

本发明属于生物检测技术领域，更具体地，本发明涉及一种塞尼卡谷病毒结构蛋白抗体酶联免疫检测试剂盒。

背景技术

塞尼卡谷病毒(SenecaValleyVirus,SVV),又称为SenecavirusA(SVA)，是猪原发性疱疹病(Swineidiopathicvesiculardisease，SIVD)的主要病原。SVV感染猪群后，尽管不会造成较大政治、经济损失，但所引起的水疱性病变，与口蹄疫病毒、猪水泡病、水泡性口炎、猪水疱疹等造成的病变相似，给临床鉴别诊断造成了一定的困难。目前，北美、南美地区以及澳大利亚都有猪群发生SIVD的报道。2015年我国及巴西出现了几次SVV感染猪群并出现严重的临床及死亡症状，造成了严重的经济损失，我国于2016年也首次分离到了SVV。

SVV是小RNA病毒科(Picornaviridae)塞尼卡病毒属(Senecavirus)的唯一成员，SVV为单股、正链、不分节段的RNA病毒。通过对小RNA病毒科的12个代表性病毒属病毒进行全基因组序列比对发现，塞尼卡病毒属与心肌炎病毒属遗传关系最近。SVV为直径约27nm的二十面体无囊膜单股正链不分节段的RNA病毒。病毒基因组含有7280个核苷酸，一个开放阅读框含有6543个核苷酸，编码2181个氨基酸的多聚蛋白，可以分割成12个多肽，构成标准的小RNA病毒科L-4-3-4模式。

与所有小RNA病毒科成员一样，P1多肽由3C蛋白酶裂解成VP0、VP3和VP1，构成病毒核衣壳。成熟的VP0裂解生成VP2和VP4。病毒VP1～VP4亚基蛋白结构保守，可能与病毒的细胞嗜性有关。VP2和VP4某些区域相互作用参与核酸包装。

由于我国于2016年首次分离到了SVV，目前有关SVV抗体检测的方法尚处于研究阶段，SVV抗体检测方法相关的研究主要有间接ELISA和竞争ELISA。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于检测塞尼卡谷病毒结构蛋白抗体的间接ELISA检测试剂盒，该试剂盒利用塞尼卡谷病毒结构蛋白VP1、VP2和VP3抗原表位多肽作为包被抗原，建立了一种特异性、敏感性和重复性好的间接ELISA方法，用于检测猪血清中是否含有塞尼卡谷病毒结构蛋白抗体。

为了达到上述目的，本发明首先筛选得到了性能优异的塞尼卡谷病毒抗原表位多肽组合物，本发明提供的塞尼卡谷病毒结构蛋白抗原表位多肽组合物，为序列表中序列1所示的多肽、序列表中序列2、序列表中序列3所示的多肽或序列表中序列4所示的多肽中的一种或两种以上的任意组合。当所述多肽组合物为序列1所示的多肽、序列2所示的多肽、序列3所示的多肽和序列4所示的多肽中的两种时，两种多肽的质量比为(0.5～1.5)：(0.5～1.5)；优选的，它们的质量比为1：1；当所述多肽组合物为序列1所示的多肽、序列2所示的多肽、序列3所示的多肽和序列4所示的多肽中的三种时，任意三种多肽的质量比为(0.5～1.5)：(0.5～1.5)：(0.5～1.5)；优选的，它们的质量比为1：1：1；

当所述多肽组合物由序列1所示的多肽、序列2所示的多肽、序列3所示的多肽和序列4所示的多肽组成时，它们的质量比为(0.5～1.5)：(0.5～1.5)：(0.5～1.5)：(0.5～1.5)；优选的，它们的质量比为1：1：1：1。