[发明专利]高效分泌表达猪瘟E2蛋白的CHO细胞株的培养方法及其应用有效
| 申请号： | 201710687334.4 | 申请日： | 2017-08-11 |
| 公开（公告）号： | CN107974432B | 公开（公告）日： | 2021-04-23 |
| 发明（设计）人： | 钱泓;吴有强;卞广林;吴素芳;车影;查银河 | 申请（专利权）人： | 浙江海隆生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10 |
| 代理公司： | 北京乾诚五洲知识产权代理有限责任公司 11042 | 代理人： | 付晓青;李广文 |
| 地址： | 312000 浙江省绍兴市*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 高效 分泌 表达 猪瘟 e2 蛋白 cho 细胞株 培养 方法 及其 应用 | ||
1.一种分泌表达猪瘟E2蛋白或BVDV-E2蛋白的CHO细胞株的培养方法，其特征在于，所述培养方法包括以下步骤：
1)将分泌表达猪瘟E2蛋白或BVDV-E2蛋白的CHO细胞株在无血清培养基中逐级放大培养，所述无血清培养基为Dynamis和EX-CELL 302且含有25μM MSX，所述Dynamis和所述EX-CELL 302体积比为6:4；
2)将放大培养后的细胞转入生物反应器中在无血清培养基中进行发酵培养，所述无血清培养基为Dynamis和EX-CELL 302且不含有25μM MSX，所述Dynamis和所述EX-CELL 302体积比为6:4；所述发酵培养的初期培养温度为36.5～37.5℃，pH为7.05～7.25；从发酵培养的120±2h开始，将培养温度下调至31.5～32.5℃，并将pH下调至6.90～7.10，其中，需在96±2h和216±2h时添加无血清培养基，在96±2h和216±2h时添加的无血清培养基为CDEfficent Feed C，所述CD Efficent Feed C浓度为79.6g/L；每次添加的所述CD EfficentFeed C的体积为步骤1)中的所述无血清培养基和步骤2)中的所述无血清培养基的总体积的10％；在整个发酵培养的过程中，控制溶氧为20％～60％；在生物反应器中发酵的第12天后，收获细胞发酵液。
2.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于，步骤1)中，逐级放大培养时每48～72小时进行传代摇瓶培养，经过300ml、1.8L摇瓶培养扩增后，转入生物反应器中进行发酵培养，所述传代摇瓶培养时摇床设置的条件为37℃，100rpm，5％CO2。
3.根据权利要求1或2所述的培养方法，其特征在于，步骤1)中，逐级放大培养过程中，每次传代时细胞密度为1～3×106VC/ml，接种时细胞密度为0.2～0.4×106VC/ml。
4.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于，步骤2)中，发酵培养的整个过程中，控制溶氧为40％。
5.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于，步骤2)中，发酵培养的整个过程中，控制葡萄糖的浓度为2.5～4g/L。
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