[发明专利]一种孜然种子多肽部位的制备方法及其应用

权利要求书

1.一种孜然种子多肽部位的制备方法，其特征在于该方法以孜然种子粉为原料，具体操作按下列步骤进行：

a、取孜然种子粉，按料液重量比为1∶5加入石油醚，在室温下搅拌2－3小时，反复提取3-4次至未有油脂提取出为止，抽滤，合并沉淀，自然干燥至未有石油醚溶剂残留为止，得到脱脂的孜然种子粉；

b、将步骤a中充分脱脂的孜然种子粉按料液重量比为1∶5加入浓度为50%乙醇，在室温下搅拌提取2-3小时，反复提取3-4次，减压抽滤，合并提取液，分离杂物，得到多肽粗提取溶液，备用；

c、将步骤b中得到的多肽粗提取溶液，利用蒸馏水稀释至浓度为10%-20%的乙醇溶液，将稀释的提取溶液上已用10%-20%的乙醇平衡好的反相碳18色谱柱，流速为3ml/min，在紫外检测仪280纳米下进行洗脱，用浓度为30%、50%或70%乙醇洗脱，得到粗多肽30%、50%或70%部位：

d、将步骤c得到的粗多肽各部位利用旋转蒸发仪浓缩至无乙醇溶液残留后分别冷冻干燥，压力10Pa，温度-82℃，得到孜然种子30%、50%或70%乙醇洗脱部位；

e、将步骤d得到的孜然种子30%、50%或70%乙醇洗脱部位溶解于pH 8磷酸缓冲溶液0.05mmol/L， 10000转/ min离心10分钟，取上清液，上已用浓度为0.05 mmol/L pH 8磷酸缓冲溶液平衡的琼脂糖凝胶阴离子交换树脂色谱柱，流速为3ml/min，在紫外检测仪280纳米下进行洗脱回收阴离子交换树脂琼脂糖凝胶未结合部位；

f、将步骤e 得到的阴离子交换树脂琼脂糖凝胶未结合部位回收液的pH调为6，上已用浓度为0.05 mmol/L pH 6磷酸缓冲溶液平衡的阳离子交换树脂色谱柱，流速为3 ml/min，在紫外检测仪280纳米下进行洗脱后回收阳离子交换树脂未结合部位，将得到的阳离子交换树脂未结合部位洗脱回收液采用截留分子量为1kDa的再生纤维素透析袋透析48小时后冷冻干燥，取得孜然种子粗多肽30%、50%或70%乙醇洗脱部位的中性多肽；

g、将步骤e洗脱后的琼脂糖凝胶阴离子交换树脂的柱子以浓度为0.5mol/L pH8的磷酸缓冲溶液加入氯化钠洗脱液洗脱回收阴离子交换树脂结合部位，采用截留分子量为1kDa的再生纤维素透析袋透析48小时后冷冻干燥，取得孜然种子粗多肽30%、50%或70%乙醇洗脱部位的酸性多肽；

h、将步骤f 得到的阳离子交换树脂色谱柱结合部位以浓度为0.5 mol/L pH6的磷酸缓冲溶液加入氯化钠洗脱液洗脱回收阳离子交换树脂结合部位，采用截留分子量为1KDa的再生纤维素透析袋透析48小时后冷冻干燥，取得孜然种子粗多肽30%、50%或70%乙醇洗脱部位的碱性多肽；

i、将得到的孜然种子粗多肽30%、50%或70%乙醇洗脱部位分离后的酸性、中性或碱性多肽溶解于纯净水中，上分别已用纯净水平衡好的浓度为100mg/ml葡聚糖凝胶-25色谱柱脱盐，温度42℃浓缩回收，冷冻干燥、包装得到孜然种子多肽部位。

2.一种如权利要求1所述方法获得的孜然种子多肽部位在制备抗白色念珠菌、大肠埃希氏菌和金黄色葡萄球菌生物活性的药物中的用途。

3.一种如权利要求1所述方法获得的孜然种子多肽部位在制备食品添加剂中的用途。