[发明专利]基于重水标记的拉曼光谱快速检测牛奶中沙门氏菌的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测牛奶中沙门氏菌的方法，具体涉及一种基于重水(D₂O)标记的拉曼光谱快速检测牛奶中沙门氏菌的方法，属于致病菌检测技术领域。

背景技术

沙门氏菌是一种常见的食源性致病菌，是需氧兼性厌氧的无芽孢菌，属革兰氏阴性肠杆菌科，已发现的近一千种(或菌株)。其可在温度范围(10-42℃)很广的条件下生长，最适温度为37℃，最佳pH值为6.8-7.8。沙门氏菌分布广，有些可引起人类、家畜以及野生禽兽动物的疾病，是引起人类食物中毒的重要病原菌。据统计近年来在世界各国细菌性食物中毒中，沙门氏菌引起的食物中毒经常列榜首，我国内陆地区也以沙门氏菌为首位，对人们造成了很大的健康危害和经济损失。当前食品安全问题突出，由食源性致病菌引起的食品安全问题，更是引起了各国政府和学术研究机构的重视。

在国内沙门氏菌检测的常规方法，多采用微生物培养的传统方法，其主要步骤包括前增菌(8-18h)、增菌(18-24h)、平板培养分离(18-24h)、生化试验和血清学鉴定等步骤。该方法结果准确可靠，但操作繁琐，耗时长，且需要多种试剂，已不能满足当代食源性致病菌的检测需求。

发明内容

本发明的主要目的在于提供一种基于重水标记的拉曼光谱快速检测牛奶中沙门氏菌的方法，其具有操作简便、快速便捷等特点，从而克服了现有技术中的不足。

为实现上述发明目的，本发明采用了如下技术方案：

本发明实施例提供了一种基于重水标记的拉曼光谱快速检测牛奶中沙门氏菌的方法，其包括：

将可能含有沙门氏菌的待测牛奶加入含重水的培养基进行培养，之后收集培养后的菌体细胞进行拉曼光谱扫描，并对获得的原始拉曼光谱进行分析处理，实现对待测牛奶中沙门氏菌的检测。

在一些较为具体的实施方案中，若所述待测牛奶中存在氏菌，则在相应原始拉曼光谱中于2040cm^-1-2300cm^-1有CD峰出现。

在一些较为具体的实施方案中，所述的方法包括：

(1)将一系列不同浓度的沙门氏菌种子液分别加入含重水的培养基中进行培养至对数期，之后于不同时间点分别收集菌体细胞，进行拉曼光谱扫描，对获得的拉曼光谱进行分析处理，获得CD/(CD+CH)％-原始沙门氏菌浓度的Log值标准曲线，其中，CD/(CD+CH)％为拉曼光谱中CD峰峰高与CD峰和CH峰峰高之和的比值；

(2)将可能含有沙门氏菌的待测牛奶加入含重水的培养基中进行培养至对数期，之后于不同时间点分别收集菌体细胞，进行拉曼光谱扫描，对获得的拉曼光谱进行分析处理，并与所述标准曲线对照，从而测得待测牛奶中的沙门氏菌浓度。

在一些较为具体的实施方案中，步骤(2)还包括设置激光拉曼光谱仪的工作参数，所述的工作参数包括激发光的波长、激光功率和扫描时间。

优选的，所述激发光的波长被设置为532nm，激光功率被设置为8mw，扫描时间被设置为10s。

较之现有技术，本发明基于D₂O标记、利用拉曼光谱对牛奶中的沙门氏菌进行快速检测，具有检测时间短(4-8h)，灵敏度高、成本低、易于操作、方便快捷等优点，检出限为10⁴-10⁸cfu/mL，受牛奶样品中基质的干扰小，是一种理想的沙门氏菌快速检测方法，具有很好的实际应用前景，适于在食品安全、环境监测等领域广泛应用。

附图说明

图1a-1f分别示出了本发明一典型实施例中沙门氏菌在不同培养基中的生长曲线，及对应的拉曼光谱。

图2a-图2c分别示出了本发明一典型实施例中沙门氏菌在50％D₂O制得的培养基中，分别培养4h、6h、8h时，CD/(CD+CH)％与添加菌体浓度的Log值的线性关系曲线图。

图3a和图3b分别示出了本发明一典型实施例待测牛奶中沙门氏菌在50％D₂O制得的培养基中的拉曼光谱图及CD/(CD+CH)％与添加菌体浓度的Log值的线性关系曲线图。

具体实施方式