[发明专利]一种基于Au@AgNPs的功能化的酚醛树脂微孔碳球的免疫传感器的制备方法及应用

说明书

本发明属于免疫分析和生物传感技术领域，提供了一种基于Au@AgNPs的功能化的酚醛树脂微孔碳球的免疫传感器的制备方法及应用。具体是采用负载Au@AgNPs的功能化的酚醛树脂微孔碳球作为标记物，制备了一种检测肿瘤标志物抗原的电化学免疫传感器，实现了常见肝癌肿瘤标记物AFP、CEA的检测，具有特异性强，灵敏度高，检测限低，具有重要的科学意义和应用价值。

技术领域

本发明属于新型功能材料与生物传感检测技术领域，提供了一种基于Au@AgNPs的功能化的酚醛树脂微孔碳球的免疫传感器的制备方法及应用。具体是采用Au@AgNPs的功能化的酚醛树脂微孔碳球作为检测抗体标记物，制备了一种检测肿瘤标志物抗原的电化学免疫传感器。

背景技术

肝癌是一种对人体危害很大的疾病，也是所有癌症中死亡率，死亡速度最快的恶性肿瘤之一。肝癌癌肿瘤标志物AFP、CEA的灵敏检测，在临床上对于肿瘤的早期发现，肿瘤高危人群的筛选、良性和恶性肿瘤的鉴别诊断、肿瘤发展程度的判断，肿瘤的治疗效果的观察和评价及肿瘤复发和预后的预测产生极大的影响，引起人们的广泛关注。

目前电化学免疫传感器已经广泛用于肿瘤标志物的检测，夹心型电化学免疫传感器结合了高特异性的免疫分析技术和高灵敏的电化学分析技术，具有灵敏度高、制备简单、检测快速、成本低等优点，在临床检验、环境监测、食品安全控制、生物监测等领域都有重要的应用价值。

本发明成功构建了一种基于Au@AgNPs的功能化的酚醛树脂微孔碳球的免疫传感器。聚多巴胺功能化的酚醛树脂硬碳微球是三维的微孔球状结构，多孔结构能够促进电活性物质的在材料表面的吸附，缩短离子在孔径间的传输距离，减小材料的电荷转移电阻，提高了导电性能。功能化后的碳球能与贵金属纳米粒子形成稳定的化学键，能有效吸附贵金属纳米粒子，同时还能减小纳米粒子的团聚效应。金银核壳纳米粒子相对于单金属纳米粒子，拥有更多的催化点位，对过氧化氢的还原反应表现出协同催化作用，大大提高了材料的电催化性能。

发明内容

本发明提供了一种基于Au@AgNPs的功能化的酚醛树脂微孔碳球的免疫传感器的制备方法及应用，实现了对肿瘤标志物的灵敏检测。

本发明的目的之一是提供一种基于Au@AgNPs的功能化的酚醛树脂微孔碳球的免疫传感器的制备方法。

本发明的目的之二是将所制备的基于Au@AgNPs的功能化的酚醛树脂微孔碳球的免疫传感器应用于肿瘤标志物的高灵敏、特异性检测。

本发明的技术方案，包括以下步骤。

1. 一种基于Au@AgNPs的功能化的酚醛树脂微孔碳球的免疫传感器的制备方法，步骤如下：

（1）将直径为4 mm的玻碳电极用Al₂O₃抛光粉打磨，超纯水清洗干净；

（2）将上述玻碳电极置于0.1 %的HAuCl₄溶液中，采用i-t法，在-0.2 V下，运行30~ 35 s；

（3）继续将6 µL、8 ~ 12 µg/mL的肿瘤标志物捕获抗体滴加到电极表面，超纯水冲洗，4 °C冰箱中干燥；

（4）继续将3 µL、0.8 ~ 1.5mg/mL的牛血清白蛋白BSA溶液滴加到电极表面，超纯水冲洗电极表面，4 °C冰箱中晾干；

（5）滴加6 µL、20 fg/mL ~ 100 ng/mL的不同浓度的肿瘤标志物抗原溶液，超纯水冲洗电极表面，4 °C冰箱中干燥；

（6）将6 µL、1 ~ 3 mg/mL的负载Au@AgNPs的功能化的酚醛树脂微孔碳球检测抗体孵化物溶液，滴涂于电极表面上，置于4 °C冰箱中晾干，制得一种基于Au@AgNPs的功能化的酚醛树脂微孔碳球的免疫传感器。

2.所述的Au@AgNPs，制备步骤如下：