[发明专利]一种基于Au@AgNPs的功能化的酚醛树脂微孔碳球的免疫传感器的制备方法及应用

权利要求书

1.一种基于Au@AgNPs的功能化的酚醛树脂微孔碳球的免疫传感器的制备方法，其特征在于，步骤如下：

（1）将直径为4 mm的玻碳电极用Al₂O₃抛光粉打磨，超纯水清洗干净；

（2）将上述玻碳电极置于0.1 %的HAuCl₄溶液中，采用i-t法，在-0.2 V下，运行30 ~ 35s；

（3）继续将6 µL、8 ~ 12 µg/mL的肿瘤标志物捕获抗体滴加到电极表面，超纯水冲洗，4°C冰箱中干燥；

（4）继续将3 µL、0.8 ~ 1.5mg/mL的牛血清白蛋白BSA溶液滴加到电极表面，超纯水冲洗电极表面，4 °C冰箱中晾干；

（5）滴加6 µL、20 fg/mL ~ 100 ng/mL的不同浓度的肿瘤标志物抗原溶液，超纯水冲洗电极表面，4 °C冰箱中干燥；

（6）将6 µL、1 ~ 3 mg/mL的负载Au@AgNPs的功能化的酚醛树脂微孔碳球检测抗体孵化物溶液，滴涂于电极表面上，置于4 °C冰箱中晾干，制得一种基于Au@AgNPs的功能化的酚醛树脂微孔碳球的免疫传感器；

所述负载Au@AgNPs的功能化的酚醛树脂微孔碳球检测抗体孵化物溶液，其特征在于，制备步骤如下：

（1）酚醛树脂微孔碳球的制备

取20 mL超纯水，8 mL无水乙醇，0.1 mL、质量分数为25 %的氨水加入烧杯中，搅拌10 ~20 min；依次加入0.2 ~ 0.4 g苯酚和0.25 ~ 0.35 mL、质量分数为37%的甲醛溶液，在30 °C恒温水浴下搅拌反应24 h；将转移到聚四氟乙烯高压釜中100 °C下老化24 h，离心洗涤，所得固体在40 °C真空干燥箱中干燥16 ~ 24 h；将干燥好的固体与KOH按质量比4：1混合，研磨1h，进行活化处理，后放入管式电阻炉内在氮气的保护下进行碳化；碳化完成后，从电阻炉内取出，用10 %的盐酸浸泡1 h，离心洗涤，干燥，备用；

所述碳化具体步骤如下：以1 °C/min的速度升温至350 °C，恒温保持1 h；然后以2 °C/min升温至700 °C，恒温保持2 h；后冷却至室温；

（2）负载Au@AgNPs的功能化的酚醛树脂微孔碳球的制备

将30 ~ 50 mg的酚醛树脂微孔碳球超声分散在15 mL、10 mmol/L的pH=8.5的三羟甲基氨基甲烷缓冲液中，加入10 ~ 15 mg的盐酸多巴胺，在室温条件下震荡24 h；加入5 ~ 7 mL的上述制备的Au@AgNPs继续震荡1 h；用超纯水离心洗涤三次，40 °C真空干燥箱中干燥16~ 20 h，制得负载Au@AgNPs的功能化的酚醛树脂微孔碳球固体粉末；

（3）负载Au@AgNPs的功能化的酚醛树脂微孔碳球检测抗体孵化物溶液的制备

将2 ~ 6 mg的负载Au@AgNPs的功能化的酚醛树脂微孔碳球超声分散于1 mL的pH=7.0的磷酸盐缓冲溶液中，再加入100 μL、80 ~ 120 μg/mL的肿瘤标志物检测抗体溶液和900 μL、50 mmol/L的pH=7.0的磷酸盐缓冲溶液，4 °C恒温振荡培养箱中振荡，孵化12 h，制得负载Au@AgNPs的功能化的酚醛树脂微孔碳球检测抗体孵化物溶液，4 °C下保存备用。

2.如权利要求1所述的一种基于Au@AgNPs的功能化的酚醛树脂微孔碳球的免疫传感器的制备方法，所述的Au@AgNPs，其特征在于，制备步骤如下：

将64 mL、1 ~ 3 mmol/L的HAuCl₄溶液加入三口圆底烧瓶，油浴115 °C回流加热10 ~ 15min, 加入12.5 ~ 13.5 mL、38.8 mmol/L的柠檬酸钠，至溶液颜色有黄色变为酒红色，制得AuNPs溶液；

取5 ~ 7 mL的上述制备的AuNPs溶液，加入将新配置的400 ~ 600 μL、7.1 mmol/L的硝酸银水溶液震荡，待溶液由酒红色变为红棕色，用超纯水离心洗涤三次，超声分散到10 mL的超纯水中制得Au@AgNPs溶液，备用。

3.如权利要求1所述的一种基于Au@AgNPs的功能化的酚醛树脂微孔碳球的免疫传感器的制备方法，其特征在于，所述肿瘤标志物选自AFP或CEA。