[发明专利]机械破碎法提取霉菌孢子RNA的方法有效
| 申请号： | 201710662062.2 | 申请日： | 2017-08-04 |
| 公开（公告）号： | CN107365766B | 公开（公告）日： | 2020-10-02 |
| 发明（设计）人： | 许文涛;罗云波;黄昆仑;田兰芳;贺晓云;郭明璋 | 申请（专利权）人： | 中国农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10;C12R1/685 |
| 代理公司： | 北京路浩知识产权代理有限公司 11002 | 代理人： | 王文君;姚自奇 |
| 地址： | 100193 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 机械 破碎 提取 霉菌 孢子 rna 方法 | ||
1.一种机械破碎法提取霉菌孢子RNA的方法，其特征在于，包括：取霉菌孢子液，加入玻璃珠子，进行机械破碎处理，然后进行RNA提取；
以1mL霉菌孢子液计，当所述霉菌孢子液中孢子数量≥5×107个/mL，所述玻璃珠子的数量为40颗，所述玻璃珠子大小为1 mm，机械破碎处理时间为（3×5）min；其中，（3×5）min是指机械破碎5min后即拿出放置冰上降温至少30s，共进行该操作3次；
以1mL霉菌孢子液计，当所述霉菌孢子液中孢子数量为1×102个/mL，玻璃珠子数量为20颗，玻璃珠子大小为1 mm，机械破碎处理时间为（4×5）min；其中，（4×5）min是指机械破碎5min后即拿出放置冰上降温至少30s，共进行该操作4次；所述机械破碎为研磨处理。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述机械破碎法提取霉菌孢子RNA的方法包括如下步骤：
(1) 取霉菌孢子液，加入玻璃珠子，进行机械破碎处理；
(2) 把破壁后的霉菌孢子液转入一个干净的离心管，12,000 rpm离心2min，取上清；
(3) 向上清中加入1倍体积的70％乙醇；
(4) 涡旋混匀；
(5) 转移至离心柱；
(6) 12,000 rpm离心15s，弃废液；
(7) 加700 μL Wash buffer ，12,000 rpm离心15s，弃废液，放入一个新的离心管；
(8) 加500 μL Wash buffer ，12,000 rpm离心15s，弃废液；
(9) 重复(8)
(10) 再次12,000 rpm离心2min，放入一个新的收集管，室温放置5min以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液；
(11) 加50μ Rnase-free water至离心柱中央，室温放置1min，12,000 rpm离心2min；
(12) 将离心得到的溶液再加入离心柱中，室温放置1 min， 12,000 rpm离心2 min，以提高RNA浓度。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述霉菌孢子为黑曲霉孢子。
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