[发明专利]一种用于西葫芦杂交种子纯度鉴定的SSR引物及方法

说明书

本发明公开了一种用于西葫芦杂交种子纯度鉴定的SSR引物，所述引物包括引物SGSSR25的上游引物SGSSR25‑F和下游引物SGSSR25‑R，所述上游引物SGSSR25‑F的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述下游引物SGSSR25‑R的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。还公开了一种西葫芦杂交种子纯度的鉴定方法，该引物和方法可对西葫芦杂交种子及其母本、父本种子进行有效区分，快速、准确检测出杂交种子纯度，同时具有快速、准确、低成本、操作简单等优点。

技术领域

本发明属于农业的蔬菜育种与应用技术领域，具体涉及一种西葫芦杂交种子纯度的鉴定的SSR 引物及鉴定西葫芦杂交种子纯度的方法。

背景技术

西葫芦(Cucubita pepo L．)也叫美洲南瓜，是葫芦科南瓜属的一年生蔓性草本植物，西葫芦是人类晟早栽培的作物之一，其味道鲜美，营养丰富，也有药用价值的优点受到大众喜爱。在西葫芦的生产上，其适应性较强。种植周期较短，栽培相对容易，产品产量较高，供应周期很长，也比较容易贮存且适宜间作套种的好处，在我国有大范围的种植，现已成为我国瓜类蔬菜的主要栽品种之一，栽培面积次于黄瓜。利用杂种优势，培育一代杂交西葫芦品种是目前西葫芦育种的主要方法。由于在西葫芦杂交制种过程中，人工去雄不彻底或漏去雄等原因，常会出现假杂交种，导致种子遗传纯度下降，给生产造成巨大的经济损失，同时，一些不法分子或种子经营单位为追求高额利润，以劣充好，假冒伪劣种子进入市场并用于生产，造成西葫芦减产和品质降低，进而影响优良品种的市场销售信誉及其产业化发展。因此，优良一代杂交种种子真实性和／或品种纯度的快速、准确（简便、经济）鉴定成为西葫芦生产中最为迫切解决的问题之一。

传统的种子纯度鉴定方法是以播种后植株的田间形态观察为依据，其周期长、工作量大，且易受环境、季节因素影响，导致结果存在偏差。因此，开发快速、准确的种子纯度鉴定方法已成为种子科研单位和企业共同关注的课题。随着分子生物学的迅速发展，使从DNA 分子水平上对品种纯度进行基因鉴定和分析成为可能。采用分子标记技术进行种子纯度鉴定是一种快速、便捷、准确、有效的方法。微卫星序列即简单重复序列（Simplesequence repeat，SSR）分子标记，广泛存在于真核和原核生物基因组中。因其位点特异、复等位、呈共显性，在基因组序列中分布广泛等优点已经成为最为广泛的分子标记之一，也是目前作物品种鉴定和种子纯度鉴定研究中最常用的标记之一。迄今为止，尚未见到利用SSR分子标记技术鉴定西葫芦杂交种子纯度的报道。

发明内容

本发明的第一个目的在于提供一种用于西葫芦杂交种子纯度鉴定的SSR 引物，该引物能产生父本特异性标记和母本特异性标记，特异性强。

本发明的目的还在于提供一种西葫芦杂交种子纯度的鉴定方法，该方法利用上述SSR 引物，能快速、便捷、准确、有效的鉴定西葫芦杂交种子纯度。

为实现以上目的，采用以下技术方案：

一种用于西葫芦杂交种子纯度鉴定的SSR 引物，所述引物包括引物SGSSR25 的上游引物SGSSR25-F 和下游引物SGSSR25-R，所述上游引物SGSSR25-F 的核苷酸序列如SEQID NO.1 所示，所述下游引物SGSSR25-R 的核苷酸序列如SEQ ID NO.2 所示。

引物SGSSR25 的上游引物SGSSR25-F 和下游引物SGSSR25-R 的具体核苷酸序列如下：

SGSSR25-F:5’- GGCATTTCCTCCCCATTTAT-3’(SEQ ID NO.1) ；SGSSR25-R:5’-AAATATGTGGCCAGCGACTC-3’(SEQ ID NO.2)。

一种西葫芦杂交种子纯度的鉴定方法，含以下步骤：

(1) 提取西葫芦亲本以及杂种后代基因组DNA ；