[发明专利]一种用于西葫芦杂交种子纯度鉴定的SSR引物及方法

权利要求书

1.一种用于西葫芦杂交种子纯度鉴定的SSR 引物，其特征在于：所述引物包括引物SGSSR25 的上游引物SGSSR25-F 和下游引物SGSSR25-R，其序列如下所示：

SGSSR25-F:5’- GGCATTTCCTCCCCATTTAT-3’；

SGSSR25-R:5’- AAATATGTGGCCAGCGACTC-3’。

2.一种西葫芦杂交种子纯度的鉴定方法，其特征在于：含以下步骤：

（1）提取西葫芦亲本以及杂种后代基因组DNA；

（2） 以西葫芦基因组DNA 为模板，使用权利要求1 中所述的引物SGSSR25进行PCR 扩增；

（3）对扩增产物进行凝胶电泳；

（4）对电泳结果进行分析，只有同时具有亲本特异性条带的单株才为真正的杂交种，缺少其中的任意一条带记为假杂种，计算种子纯度，其中，引物SGSSR25 能产生256 bp 的父本特异性条带以及212bp 的母本特异性条带。

3.根据权利要求2所述的西葫芦杂交种子纯度的鉴定方法，其特征在于：PCR 扩增的反应总体积为25μL：50 ng基因组DNA 1μL，0.2 mmol·L^-1 dNTP 1 μL，500 μ Taq DNA聚合酶0.3 μL，0.4 μmol·L^-1的引物各1 μL，2.5 μL 10×Buffer，加入灭菌的超纯水至25 μL。

4.根据权利要求2所述的西葫芦杂交种子纯度的鉴定方法，其特征在于：步骤（2）中PCR扩增时扩增程序为：94 ℃预变性3 min；然后进行35个循环，每个循环包括94 ℃变性30 s，58 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 min；最后72 ℃延伸10 min，置于4℃保存。