[发明专利]用于生产葫芦二烯醇的工程菌及其制备方法与应用

权利要求书

1.制备用于生产葫芦二烯醇的工程菌的方法，包括如下步骤：使能够产生2,3-环氧鲨烯的受体菌株表达葫芦二烯醇合成酶，从而获得所述用于生产葫芦二烯醇的工程菌；所述葫芦二烯醇合成酶的氨基酸序列为序列表中序列5或序列6或序列7。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述方法包括如下步骤：向能够产生2,3-环氧鲨烯的受体菌株中导入所述葫芦二烯醇合成酶的编码基因，得到表达所述葫芦二烯醇合成酶的编码基因的重组菌，即为所述用于生产葫芦二烯醇的工程菌。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述葫芦二烯醇合成酶的编码基因为如下任一所示DNA分子：

(1)序列表中序列1所示的DNA分子；

(2)序列表中序列2所示的DNA分子；

(3)序列表中序列3所示的DNA分子；

(4)序列表中序列4所示的DNA分子；

(5)在严格条件下与(1)-(4)中任一限定的DNA分子杂交且编码序列表中序列5或序列6或序列7所示葫芦二烯醇合成酶的DNA分子；

(6)与(1)-(5)中任一限定的DNA序列具有99％以上、95％以上、90％以上、85％以上或者80％以上同源性，且编码序列表中序列5或序列6或序列7所示葫芦二烯醇合成酶的DNA分子。

4.根据权利要求1-3中任一所述的方法，其特征在于：所述能够产生2,3-环氧鲨烯的受体菌株为能够表达MVA途径相关酶、法呢基焦磷酸合成酶、角鲨烯合成酶和角鲨烯环氧酶的重组酵母。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述能够产生2,3-环氧鲨烯的受体菌株为向酿酒酵母NK2-SQ中导入法呢基焦磷酸合成酶的编码基因、角鲨烯合成酶的编码基因和角鲨烯环氧酶的编码基因后得到的重组酵母。

6.根据权利要求1-5中任一所述的方法，其特征在于：所述葫芦二烯醇合成酶的编码基因是通过重组表达载体导入所述能够产生2,3-环氧鲨烯的受体菌株中的；

在所述重组表达载体中，含有由来源于酵母细胞的TEF1启动子、所述葫芦二烯醇合成酶的编码基因终止子和来源于酵母细胞的CYC1t终止子组成的表达盒；

具体的，所述重组表达载体为将所述表达盒克隆入pRS313质粒或pRS425质粒后得到的重组质粒。

7.采用权利要求1-6中任一所述方法制备得到的用于生产葫芦二烯醇的工程菌。

8.根据权利要求7所述的工程菌，其特征在于：所述工程菌为酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)313-SL-CB，其保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.14173。

9.权利要求7或8所述的工程菌在生产葫芦二烯醇中的应用。

10.一种生产葫芦二烯醇的方法，包括如下步骤：将权利要求7或8所述的工程菌转接到生物反应器中后进行发酵培养；

所述发酵培养的条件为：温度20-38℃，pH4-7，溶氧15-45％，空气流量3-20L/min，搅拌转速300-1000rpm。