[发明专利]产琼胶降解酶的芽孢杆菌Bacillussp.W2017及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及微生物领域，特别是涉及产琼胶降解酶的芽孢杆菌 Bacillus sp.W2017及其应用。

背景技术

琼胶作为世界三大工业海藻胶之一，是一类以半乳糖为主要成分 的高分子多糖，它是由中性的琼胶糖和酸性的琼胶酯组成的多糖混合 物。琼胶寡糖是指琼胶经水解而得到的聚合度较小、水溶性较好的低 聚糖，包括以半乳糖为还原端的新琼寡糖和以3，6-内醚半乳糖为还 原端的琼寡糖。研究表明琼胶寡糖有多种生理活性，如抗氧化、降血 脂、免疫调节、抗过敏及抑制糖苷酶等，同时具有皮肤保湿的功效， 还能够杀死黑色素瘤细胞达到美白的效果，这表明琼胶寡糖在医用药 物，保健品，功能饲料和化妆品等方面有着很好的应用前景。

琼胶具有很强的凝胶性，0.5％即可形成坚实的凝胶，且琼胶形成 的凝胶具有两大特性：一是琼胶溶液冷却后形成凝胶，再次加热则恢 复；二是形成的凝胶其凝固点和熔点温度相差很大。这两个特性为其 在食品工业中的应用提供了方便条件，从而被广泛应用于调味酸牛 乳，牛奶布丁，果冻等产品中。但普通琼胶需要在煮沸100℃下10-15 min才完全溶解，而且溶液呈浑浊、不透明状，这一因素限制了琼胶 在食品工业中的发展。生产溶解性大的速溶琼胶不仅能节省工厂的化 料能源，还能推动琼胶在食品产业中的应用。

目前获得琼胶寡糖的主要方法有酸解法和酶解法，酸解法存在产 物不均一、重复性差、对环境污染程度大等缺点，而酶解法因效率高、 专一性强、反应条件温和作用时间短等优势成为近年来的主要研究方 向，但由于特异性琼胶酶目前存在产量低、分离难度大、寡糖产生量 低等问题，使其在工业生产中的应用受到了限制。

发明内容

基于此，有必要提供一株酶活力高、酶活稳定、产酶量高的产琼 胶降解酶的Bacillus sp.W2017及其应用。

一种芽孢杆菌(芽孢杆菌属W2017)Bacillus sp.W2017，保存于 中国典型培养物保藏中心，地址：中国，湖北省武汉市，洪山区八一 路，武汉大学，邮政编码：430072，保藏编号：CCTCC No：M 2017226， 保藏日期：2017年05月02日。

一种采用上述的芽孢杆菌Bacillus sp.W2017制备琼胶降解酶的 方法，包括：

将所述芽孢杆菌Bacillus sp.W2017进行活化得到菌液，将所述菌 液涂布到固体培养基上；

将所述固体培养基上的芽孢杆菌Bacillus sp.W2017接种于发酵 产酶培养基中；

在温度为25-35℃条件下，将所述发酵产酶培养基置于转速为 150-230r/min的摇床上培养12-16h至对数期，得到菌株的种子液；

将所述种子液接种于发酵产酶培养基中，并在温度为25-35℃， 转速为150-230r/min的摇床上培养24-48h，得到发酵液；

将所述发酵液在8000-12000r/min下离心5-20min，收集上清液， 即得到琼胶降解酶粗酶液。

在其中一个实施例中，在所述将所述种子液接种于发酵产酶培养 基中，所述种子液的接种量为5％-15％。

在其中一个实施例中，所述固体培养基包括2.0-5.0g/L的胰蛋白 胨、l.0-5.0g/L的酵母浸粉、0.01-0.1g/L的柠檬酸铁和15.0-20.0g/L 的琼胶及海水。

在其中一个实施例中，所述发酵产酶培养基包括l.0-5.0g/L的酵 母浸粉，3.0-7.0g/L的蛋白胨、1.0-5.0g/L的牛肉膏、0.01-0.1g/L的 磷酸铁、0.07-0.15g/L的琼胶及合成海水。

一种易溶琼胶的制备方法，将上述琼胶降解酶加入含有质量体积 比0.2-1.0％的琼胶底物中，在温度为30-45℃条件下，150-200r/min 的摇床上酶解12-24h，即可制备易溶琼胶。

一种芽孢杆菌Bacillus sp.W2017在制备琼胶降解酶、降解琼胶制 备琼胶寡糖、降解琼胶制备易溶解琼胶中的应用。

一种用于如上所述的Bacillus sp.W2017发酵产琼胶降解酶的培 养基，所述的培养基中的碳源包含有琼胶。

在其中一个实施例中，所述琼胶从红藻中提取。

在其中一个实施例中，所述培养基中添加有金属离子，所述金属 离子的添加质量体积百分比为0.2％-1％。