[发明专利]病理诊断用试剂盒及组织片的快速处理方法

说明书

本发明涉及病理诊断用的试剂盒及其使用方法，该试剂盒包括带有识别标记的四个冲洗瓶，其中，1号瓶装有Harri苏木精染液和Clarke氏固定液；2号瓶装有醇溶性曙红Y、无水乙醇、蒸馏水及碳酸锂；3号瓶装有透明剂；4号瓶装有用于湿性封片的中性快干胶。利用该试剂盒可以大大缩减了现有组织片处理所需的时间，减少了处理的工序环节及减少试剂用量，利于对偏远地区医疗服务的开展，可在偏远地区义诊、普查时做到当场检查，当场有病理诊断结果，利于偏远地区医疗服务水平的提高。

技术领域

本发明涉及病理诊断用的试剂盒及其使用方法，包括组织片的固定、脱水及染色。

背景技术

现有技术中，有一种用于肿瘤病理诊断的试剂盒及对组织切片进行染色的方法，其申请号：201310152840.5，申请日：2013-04-27，公开号：CN103245789A，公开日：2013-08-14，该用于肿瘤病理诊断的试剂盒，包括用于肿瘤病理诊断的探针；所述探针包括金纳米簇、肿瘤特异性标志物的抗体及考马斯亮蓝，所述金纳米簇与所述肿瘤特异性标志物的抗体通过点击化学方式连接，所述考马斯亮蓝与所述连接有所述肿瘤特异性标志物的抗体的金纳米簇通过静电方式结合；其中，所述金纳米簇、所述肿瘤特异性标志物的抗体及所述考马斯亮蓝的摩尔比为1 ～ 10:1 ～ 100:1 ～ 100。

利用该试剂盒对组织切片进行染色的方法，包括如下步骤：

1）将冰冻组织切片或预先经脱蜡水化处理后的石蜡组织切片依次浸泡于无水乙醇、质量分数为95% 的乙醇溶液以及质量分数为70% 的乙醇溶液中，每次5 分钟，然后用PBS 洗涤；

2）在组织切片上滴加体积分数为3% 的过氧化氢溶液，室温静置10 分钟，并经PBS洗涤；

3）将组织切片放入至95℃枸橼酸钠缓冲溶液中恒温浸泡10 ～ 15 分钟，并经PBS洗涤，其中，枸橼酸钠缓冲溶液的浓度为0.01mol/L ；

4）在组织切片上滴加封闭剂，于室温下封闭20 分钟后，甩去多余液体；

5）在组织切片上滴加所述用于肿瘤病理诊断的探针，室温下静置1 小时、4℃过夜或者37℃下静置1 小时，并经PBS 洗涤，其中，所述探针的终浓度为0.01 -10mmol/L ；

6）在组织切片上滴加核染剂，然后于37℃下孵育7-10 分钟，使核染剂的终浓度为0.1-10μg/ml，并经PBS 或自来水洗涤；封片，然后镜检。

国家卫生部委托由中华医学会病理学分会组织编写的《临床技术操作规范•病理学分册》记载了本发明适用的组织片的现有处理流程：

㈠涂片的处理：

1.稍干燥后即直接浸泡于固定液内，至少15-30min；

2.二甲苯Ⅰ：5-10min；

3.二甲苯Ⅱ：5-10min；（经两步二甲苯浸泡的目的在于：更利于将组织片上残留的上一步试剂与异物清除）

4.无水乙醇Ⅰ：1-3min；

5.无水乙醇Ⅱ：1-3min；（经两步无水乙醇浸泡的目的在于：更利于将组织片中的水分带走）

6. 95%乙醇：1-3min；

7. 95%乙醇：1-3min；（经两步95%乙醇浸泡的目的在于：加强了95%乙醇在组织片中的穿透力，利于将组织片中的水分带走）

8. 80%乙醇：1min；

9.蒸馏水：1min；

10.苏木精液染色：5-10min；

11.流水洗去苏木精液：1min；