[发明专利]一种细胞或溶液中生物分子的捕获方法

权利要求书

1.一种细胞或溶液中生物分子的捕获方法，其特征在于，包括如下步骤：

（I）使含有目标细胞或生物分子的介质进入包括用于捕获所述目标细胞或生物分子的捕获机构的装置中；

（II）使所述介质流经所述捕获机构，以使所述目标细胞或生物分子结合至所述捕获结构上；

（III）去除没有特异性地结合至所述捕获机构上的不需要的未结合的杂物、细胞或生物分子；

（IV）使所述目标细胞或生物分子自所述捕获机构脱离；以及

（V）收集所述目标细胞或生物分子，所述目标细胞或生物分子被计数；

其中，所述捕获机构包括一个或多个层叠的捕获筛，所述捕获筛包括网状基体及覆设于所述网状基体上的捕获层，所述捕获层含有能够与所述目标细胞或生物分子特异性结合的捕获物；

所述网状基体包括：

不锈钢体；以及

包覆所述不锈钢体表面的保护层；

其中，所述保护层由贵金属或其合金制成，所述捕获物连接至所述保护层；

步骤（V）中，通过采用阻抗测量或光学方法的电极来对所述目标细胞或生物分子进行计数，所述装置具有一微流体通道，所述电极设于所述微流体通道内，并且所述目标细胞或生物分子通过所述微流体通道被收集。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，

步骤（I）中，所述介质通过注射或泵流入所述装置；

和/或，步骤（II）中，使所述介质在流出所述装置之前多次流经所述捕获机构；

和/或，步骤（III）中，用纯水或其他温和溶剂冲洗所述捕获机构以去除所述未结合的杂物、细胞或分子；

和/或，步骤（IV）中，注入细胞分离缓冲液使所述目标细胞或生物分子脱离所述捕获机构。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤（II）中，所述注射或泵的操作方向是可转换的，所述介质先正向流经所述捕获机构，之后再反向流经所述捕获机构。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤（IV）中，注入含有胰蛋白酶的细胞分离缓冲液使所述细胞或生物分子脱离所述捕获机构。

5.根据权利要求1-4任一项所述的方法，其特征在于，所述生物分子为溶液中的或在细胞表面表达的蛋白质、寡核苷酸、酶或它们的任意组合；所述捕获物为选自抗体、寡核苷酸及分子印迹聚合物中的一种或多种的组合；所述捕获物通过物理吸附和/或化学键结合至所述网状基体上。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述生物分子为循环肿瘤细胞表面的上皮细胞粘附分子，所述目标细胞为循环肿瘤细胞，所述捕获物为能够与被在循环肿瘤细胞表面表达的上皮细胞黏附分子特异性结合的抗-上皮细胞黏附分子抗体。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，通过采用traut’s试剂或带有生物素-亲和素的硫醇盐分子将所述抗-上皮细胞黏附分子抗体连接至所述网状基体上。

8.根据权利要求1、6或7所述的方法，其特征在于，所述网状基体的尺寸为1-100 mm×1-100 mm，所述筛的孔为2 µm-800 µm，所述装置进一步包括具有入口、第一出口和位于所述入口和所述第一出口之间的腔体的主体，所述捕获机构固定在所述腔体内，所述入口、所述第一出口分别与所述腔体的两端连通；以及

步骤（I）中，使所述介质经由所述入口进入所述装置的腔体内；以及

步骤（III）中，经由所述第一出口去除未结合的杂物、细胞或分子。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述网状基体的尺寸为2-10 mm×2-10mm，所述筛的孔为20 µm-100 µm。